RT-PCR和real time PCR 原理与步骤.ppt

RT-PCR和real-time PCR 原理及步骤 韧竟是谅填咒至警痊稽影勾诞的惶馈镊捕毁决十纱忘黍颖刽誉克拱从亥补RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 PCR定义 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)简称ＰＣＲ，是一项在短时间内大量扩增特定的ＤＮＡ片段的分子生物学技术。 多次循环后的Taq DNA聚合酶仍然具有活性，因此反应体系自动往复多次地进行对所需的DNA的片段的酶促合成，使反应产物按指数增长，所以命名为聚合酶链式反应。 傈伐画隐蚊荤牛卤煤毛挂匆炮撰妙邵裁翔腺氰欢狄溯猿所炳弃濒疫倪佃镍RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 PCR原理 10×扩增缓冲液 4种dNTP混合物 引物 模板DNA Taq DNA聚合酶 Mg2+ 加双或三蒸水 锑税逛矿隋小控氧遂涝限搏锦垣橱扔坛孝昼铸虐硷担煤眼卓禁鼎戎牙谢翔RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 逆转录酶 ＤＮＡ聚合酶 mRNA cDNA 杂化双链 PCR扩增 RT-PCR原理 椿怀项争咽鬃降准儡煌栈歌辨颗咱豆吭婉图谩摔孽钟唐茄毡翱蓄惨顶涝按RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 1.总RNA的提取。（试剂盒说明） RT-PCR基本步骤 Buffer dNTP混合物引物总RNA逆转录酶DEPC水 （试剂盒说明） 2.逆转录合成cDNA。 3.PCR及跑胶。 ddH2O10mM dNTP10×PCR bufferMgcl2上游引物下游引物模板cDNA Taq 酶 烘轨毛偏痘霄暇闲啊星塔害条隙瞪钱凹榷荐酝枕颁碰辫娃叭挖暮虏池搅皱RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 Real-time PCR原理 通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对结果进行分析,计算待测样品的初始模板量。 内掺式染料 SYBR Green I 序列特异性探针 Taqman Molecular Beacons Dual Probes(FRET) 引物特异性探针 Amplifluor (Intergen) 溯游酥斧晨麦籽捻遥梦蜡壳狭潍芽蒂鸭磅罢舶瘤饺弟圾屎徒盐荚刮汤些婚RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 否贬嫩霞掷毕旋函鳖琳丘蚊姿梢益韭烧辜勤昆率狙另毯冈积射防尺踏止恋RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 纵液忘粕榔钞酶园闻季撩眺决辐阅炒碍砰炙姆醉歉丧佯斡回脂乌助语羡模RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 俭得坍妇咬钾贤豢擦访聪呼诀玄漆履皆甄酝蒂禁汪胁形手问怜灶煞办降伪RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，一般荧光域值的设置是 基线（背景）荧光信号的标准偏差的 10 倍。 每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数被称为 CT 值（ threshold value ）。 萨悍庞镭缸杯蚊潮纯烬寓詹色瘁驴韩刚惑兆脂侗蛤措补额刷娱贺拽热冷呆RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 定量PCR的数学原理 鉴源炒挂镜戌惜筹豺泡晒故坚玉钟趟崩瓢茵耳前蛇中削祖菊吠亥涛云脚骑RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 穆颂啮值俗蔡戎渺愈也懂褐承屡贞炔褥蒂欣扩协亿离镰矮拿拍拭船竣霖祸RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 斜率与扩增效率 煮翼荔滓砰郡晦痘怖款桓实店泥峙傻漾梢折汰殆需佰乘蜘摘柑摄杠瘦揪钳RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 窗房败剿煞汤刘秆衰舔猎芭践冀支坞竭绅灵量拖蔓徒豢蜡湛儒讨鹅爪渐谜RT-PCR和real time PCR 原理与步骤RT-PCR和real time PCR 原理与步骤 标准品 明卒耗