细胞生物学实验报告-鸡红细胞的融合.ppt

主要内容 （4）1000rpm离心上述溶液5min，去上清液，重复操作3次 * * * 鸡红细胞的融合 实验报告 实验原理 实验目的 实验用品 需要注意的问题 1 2 3 4 实验步骤 5 6 7 数据记录及处理 结果分析及讨论 绘图 一、实验目的 （1）了解PEG诱导细胞融合的基本原理 （2）通过细胞融合实验，初步掌握细胞融合技术 二、实验用品 （1）器材：生物显微镜、离心机、恒温水浴箱、滴管、离心管、试管架、盖玻片、载玻片、烧杯、吸水纸 （2）试剂：0.85%生理盐水、50%PEG、GKN溶液、Alsever溶液 （3）实验材料：鸡红细胞 三、实验原理 同种或异种细胞在一定介质（如病毒、化学因子或电场）的诱导下，可发生细胞间的的融合，形成较大的双核或多核细胞。聚乙二醇（PEG)可与水分子借氢键结合，在高浓度（50%）的PEG的溶液中，自由水消失，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，引起细胞融合，PEG融合技术的关键是要选择合适的相对分子质量（1000~6000）、浓度（30%~50%）以及作用时间。 click 四、实验步骤 （1）鸡血与Alsever溶液按1:4混匀，4℃冰箱中保存 （2）取1ml细胞悬液，加Alsever溶液稀释20~25倍 （3）取上稀释悬液1ml，加5ml0.85%生理盐水混匀 （5）第三次离心去上清液后，加GKN 0.5ml制成10%悬液，放在37℃水浴箱预热2~3min （6）逐滴0.25ml的50%的PEG溶液，边加边摇匀，37℃恒温静置15min （7）取上述液一滴，盖上盖玻片，镜检 五、数据记录及处理 观察四个视野中的细胞，记录鸡血细胞融合情况如下表所示 1 0 3 31 4 0 1 2 28 3 1 0 3 26 2 12 105 0 2 4 30 1 所有融合细胞核总数 所有细胞核总数 3核细胞 2核细胞 视野内融合细胞核数 视野细胞核总数 2、数据处理：由上表原始数据得视野内发生融合的细胞核数为12个，视野内所有细胞核总数为105个，由公式： 融合率=视野内发生融合的细胞核数/视野内所有细胞核数× 100% =12/105 ×100% =11.4% 3、实验结果：鸡红细胞的融合率为11.4% 七、结果分析及讨论