细胞生物学的研究技术和方法线粒体活体染色与观察.ppt

请同学们按学号坐好,先不要开电脑显微镜 II 线粒体活体染色与观察 了解线粒体的原位分布； 了解活体染色的原理和方法。 一、实验目的 二、实验原理 线粒体上的细胞色素氧化酶系可保持詹纳斯绿B染料始终处于氧化状态而呈绿色。 活体染色： 应用无毒或毒性较小的染色剂显示活细胞内某些天然结构，是对细胞生命活动影响较小的一种染色方法。 20min 实验步骤 （点击图片查看详细介绍） 2008级临床K4班学生实验结果 取材部位及力度； 盖片的技巧； 染液干后的处理。 四、注意事项 简述用于细胞的显微和亚显微结构研究的技术及其特点； 简述细胞培养的概念； 请描述线粒体活体染色的显微观察结果。 五、作业 * * 李 姣 （吴明松） 细胞生物学与遗传学教研室 2014.11～2014.12 TEL：8609692 E-mail: 270378076@qq.aom 1号综合楼2-25室 预习； 穿白大衣并扣好； 认真操作； 爱护仪器； 保持卫生； 保持安静。 实验室规则 1 #############。 2 #########。 3 ############。 4 ############# ######。 5 #############。 6 ######### 7 ######### 实验课要求 实验室安全注意事项 实验完成后检查水电； 实验动物回收焚烧：填表责任制； 了解化学试剂毒性和安全使用规则； 突发情况处理及逃生，如各种原因起 火分别用关电闸、盖布、打开门窗、报警，及其他突发情况，依次离开实验室及大楼等。 本学期实验教学进度安排 第一次 (验证性) 细胞生物学研究技术和方法 线粒体的活体观察 第二次 (验证性) 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 细胞内DNA和RNA的原位显示 第三次 (验证性) 细胞膜的通透性观察 小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察 第四次 (验证性) 细胞内过氧化物酶的原位显示 细胞有丝分裂的观察 第五次 (设计性) 设计性实验报告汇报及指导 第六次 (设计性) 动物细胞融合 细胞核的分离与鉴定 第一次实验 Ⅰ 细胞生物学的研究技术和方法 Ⅱ 线粒体活体染色与观察 I 细胞生物学的研究技术和方法 细胞形态结构研究技术 显微观察 亚显微观察 细胞的培养技术 细胞组分的分离纯化技术 细胞和亚细胞组分的测定 分级分离技术 层析法 电泳法 细胞化学法 荧光细胞化学法 放射自显影技术 显微结构 microscopic structure 在光学显微镜下所观察到的细胞结构 亚微结构 submicroscopic structure 细胞内小于0.2μm的细微构造，通常 使用各种电子显微镜进行观察 细胞形态结构研究技术 分辨力（率） resolution 显微镜或人眼在25cm的明视距离处能够区分相近两点最小距离的能力。 普通光学显微镜 light microscope，LM 染色后可观察线粒体、中心体、细胞核等结构 最大分辨力一般为0.2μm 相差显微镜 phase contrast microscope 观察活细胞的微细结构和变化 暗视野显微镜 dark field microscope 反差大、分辨力高（0. 04μm) 观察活细胞内细胞器以及液体介质中的细菌和真菌 等的存在和运动 荧光显微镜 fluorescence microscope 光源——紫外线 细胞荧光化学，特别是免疫荧光技术中的重要工具，可观察细胞或标本中的荧光现象 分辨力达0.08nm 观察细胞内部结构 二维平面图像 透射电子显微镜 TEM 扫描电子显微镜 SEM 分辨力一般在3nm 观察细胞（样本）表面形貌 三维立体图像 细胞的培养技术 细胞培养 cell culture 细胞在体外的培养技术，即在无菌条件下，从机体中取出组织或细胞，模拟机体内正常生理状态下生存的基本条件，让它在培养器皿中继续生存、生长和繁殖的方法。 原代培养 primary culture 直接从机体获取的组织或细胞进行的首次培养。 原代细胞以一定比例转移到另一个或几个容器中的扩大培养。 传代培养 secondary culture 一般传一次称为一代 细胞融合 cell fusion 又称为细胞杂交，指细胞彼此接触时，两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的现象。 含有同一亲本细胞核的融合细胞 含有不同亲本细胞核的融合细胞 同核体 homokaryon 异核体 heterokaryon 细胞融合技术 自然融合 人工诱导融合 细胞融合技术是研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤等的重要手段，尤其对单克隆抗体及细胞去分化的研究开拓了一条新的途径 物理 化学 生物 细胞组分的分离纯化