结核分枝杆菌实验室检测方法.ppt

目前建立多种血清学检测方法，市售商品化试剂盒很多，但是遗憾的是，这些血清学检测方法诊断性能参差不齐，还是没有一种血清学检测方法能取代传统的痰涂片检测用于肺结核和肺外结核的临床诊断。 * * * * 结核分枝杆菌实验室检测方法 分枝杆菌属 一类细长略带弯曲，有时呈分枝状的杆菌，本属细菌多具有抗酸性，又称抗酸杆菌（acid-fast bacillus），细菌体内含有分枝菌酸，细胞壁含有大量脂类，这与分枝杆菌的染色性、抵抗力和致病性等密切相关。 本属细菌已经被鉴定的有70多种，可分为三大类：结核分枝杆菌、非典型分枝杆菌、麻风分枝杆菌； 按生长速度可分为三类，即缓慢生长菌、迅速生长菌和不能培养菌三种类型 结核分枝杆菌群 结核分枝杆菌，是人和动物结核病的病原体，包括人结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）、牛分支杆菌（M.bovis）、非洲分支杆菌（M.africanum）和田鼠分枝杆菌（M.microti），前三种对人类治病，其中人型结核分枝杆菌感染发病率最高。 结核分枝杆菌属于缓慢生长分支杆菌 非典型分枝杆菌 偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟/脓肿、胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶然分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、浅黄分枝杆菌、土分枝杆菌、草分枝杆菌、不产色分枝杆菌、海-溃疡分枝杆菌、金色分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌等 偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌龟亚种、龟分枝杆菌脓肿亚种属于迅速生长型，鸡蛋培养基上3-5天可见菌落 其他非典型分枝杆菌多为缓慢生长型 麻风分枝杆菌 麻风分枝杆菌（M.leprae）是麻风病的病原体，也是抗酸杆菌，但较结核分枝杆菌短而粗，两端尖细，抗酸染色着色均匀，呈束状或团状排列，结核分枝杆菌多散在，偶有聚集。为典型的胞内寄生菌，有麻风杆菌存在的细胞胞浆呈泡沫状，称麻风细胞。 体外不能培养。 全球约有1/3的人口已经感染结核分枝杆菌，有2000万活动性肺结核患者，每年新发病例900万人，每秒钟有1人感染结核，每年有300万人死于结核病。 随着抗结核药物的不断发展和卫生生活状况的改善，结核的发病率和死亡率曾一度大幅下降 20世纪80年代后，由于艾滋病和结核分枝杆菌耐药菌株的出现、免疫抑制剂的应用、吸毒、贫困及人口流动等因素，全球范围内结核病的疫情骤然恶化 结核分枝杆菌 * 生物学形状 结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，有时可见 分枝状，无芽孢和鞭毛，因衰老或抗结核药物的 作用可出现多形态，如球状、串珠状或丝状， 大小为1～4X0.4μm。 细胞壁中含有大量脂质而不易着色，特别是有 大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，一般 用抗酸染色。萋尼染色呈红色，背景为蓝色； 荧光染料金胺“O”染色，荧光显微镜下为橘黄色 培养特性 * 实验室检测方法 萋尼染色+荧光染色 罗氏培养+分枝杆菌快速培养 抗原抗体检测 细胞因子检测 荧光定量PCR 芯片杂交 病原学 免疫学 分子生物学 涂片镜检--抗酸染色 抗酸染色是目前为止最快的结核检出方法，可用来检测病情进展，为感染控制提供参考依据，可确证培养物为阳性 萋尼染色法—红色—普通显微镜（高倍） 荧光染色—黄或橘色—荧光显微镜（低倍） 联染法：敏感性高，特异性好，速度快！ 抗酸染色局限性 抗酸染色对分枝杆菌非特异，其他如Nocardia（奴卡）、Rhodococcus（红球菌属）、Legionella micdadei（军团菌）、cryptosporidium（隐孢子虫）、Isospora（等孢球虫）等有抗酸菌特点 不能区分结核和非结核分枝杆菌 不能区分活菌和死菌 敏感性差，一般1mL痰中有5000-10000条菌时可检出，而培养可检出10-100条菌. 发光二极管荧光显微镜（LED） 荧光显微镜成本高、易损坏、耗电量大、光源寿命短、显微镜价格昂贵且需要在暗室内工作等，荧光染色法一直没有在结核病痰涂片诊断中得到广泛的应用。 只需将二极管替换普通光学显微镜的目镜就相当于一台荧光显微镜，组装的“荧光显微镜”结合金胺O染色在结核病痰涂片检查中有一定的应用价值。 田斌等，发光二极管荧光显微镜在基层实验室诊断结核分枝杆菌的应用评价. 实用预防医学2012年10月第19卷第10期. 分枝杆菌培养技术 结核菌培养仍是目前诊断的金标准．尤其是药敏试验结果在指导临床用药及耐药性检测等方面具有重要作用, 是鉴定是否为活菌的可靠方法． 1、传统的固态培养法 需要4～6周才能检测到结核菌的生长．而且阳性率也只有30％-40％；特异性差．各种分枝杆菌均可生长。要确定是否为结核菌．需结合分枝杆菌菌种鉴定和药物敏感性试验。 2、分枝杆菌快速液体培养技术 BD公司推出的BACTEC—MGIT 960全自