第一篇_第二章食品中有毒有害物质的快速检测方法10.ppt

第一节 农药残留的快速检测 第二节 兽药残留的快速检测 第三节 真菌毒素及化学污染物的快速检测 第四节 致病微生物的快速检测 第五节 食品中异物的检测方法 一、何为快速检测 快速检测没有经典的定义，而是一种约定俗成的概念，即：包括样品制备在内，能够在短时间内出据检测结果的行为称之为快速检测。 二、快速检测的时间概念 理化快速检验方法：包括样品制备在内，能够在两小时以内出具检测结果，即可视为实验室快速检测方法。 如果方法能够应用于现场，在30分钟内出具检测结果，即可视为现场快速检测方法。如果能够在10几分钟甚至几分钟内得到检测结果，可视其为比较理想的现场快速检测方法。 微生物快速检验方法：与传统检验方法相比，能够缩短1/2或1/3的检测时间，就可得到检测结果, 可视为快速检测方法。 第一节 农药残留的快速检测 农药是指用于消灭、控制危害农作物的害虫、病菌、鼠类、杂草、及其它有害动植物和调节植物生长的药物。 按用途分九种： 杀虫剂、杀螨剂、杀线虫剂、杀软体动物剂、杀鼠剂、杀菌剂、除草剂、脱叶剂、植物生长调节剂。 农药残留：农药使用后残存于生物体、农副产品和环境中的微量农药原体、毒代谢物、降解物和杂质的总称，残存的数量称残留量，一般以每千克中有多少毫克表示。 农药残留量是施药后的必然现象，但如果超过最大残留量，对人畜产生不良影响或通过食物链对生态系统中的生物造成毒害，则称为农药残留毒性（简称残毒）。 目前，我国农药残留较为突出的是蔬菜中的农药残留问题。近年来蔬菜被农药污染的情况有增无减，有机磷农药残留尤为突出。 控制蔬菜中农药残留对人体的危害，最为有效的方法之一是加强对蔬菜中的农药残留检测的力度。 传统的农药分析主要依赖于气相或液相色谱等仪器，仪器分析虽然可以检出样品中较微量的农药，但操作复杂、费时费工、检测成本较高。 农药残留快速测定法从仪器使用上分为： 气相色谱仪法 液相色谱仪法 农药残留分光光度法(抑制率法) 目视法(如有机磷农药速测灵法、农药残 留试纸法、酶片法)。 一、免疫分析技术 ? 常用于农药残留分析的免疫分析技术有： 先将放射性同位素标记已知抗原或抗体，与待检标本反应后，用γ射线探测仪或闪烁计算器测定γ射线或β射线的放射性强度，根据放射性强度计算标本中抗原或抗体的含量。 它将放射性核素显示的高灵敏性和抗原抗体反应的特异性结合，使检测的敏感性达10pg水平。 常用于标记的同位素有8H、125I和3H 。 测定方法与步骤 (1)抗原抗体反应：平衡法。 (2)分离结合与游离标记物 沉淀剂沉淀复合物，离心分离。 (3)放射性测定及数据处理 晶体闪烁计数仪(γ射线)或液体闪烁计数仪( β射线) 绘制标准曲线，计算待检抗原浓度。 酶联免疫吸附法 （enzyme linked immunosorbant assay， ELISA） 酶联免疫吸附法是把抗原抗体反应的特异性和酶的高效催化作用有机结合起来的一种免疫检测技术。 将已知抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯板)上进行酶免疫反应，检测相应的抗体或抗原。 应用：食品中毒素的测定、食品有害微生物的快速检测、食品中农药残留的检测、食品中抗生素残留的检测 （如氯霉素） ELISA基本原理 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。 用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。 加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。 ELISA原理图 ELISA基本的实验过程 ELISA的一般操作方法 固相载体的准备：最常用的是聚苯乙烯微量反应板，规格有40孔、72孔、96孔，板孔呈凹型，应用方便。 抗原或抗体的包被：将Ag或Ab吸附到固相载体的过程称为包被。 固相载体的封闭：固相载体包被Ag(或Ab)后，载体表面可能因残留未吸附蛋白质的活性部位而吸附抗体或酶标抗体，引起试验误差；因此需事先用含0.5％BSA-0.05％吐温-20的PBS封闭30～60分钟（37℃），以降低非特异性吸附。 固相载体的洗涤：洗涤是在整个酶联免疫吸附测定的操作过程中不可缺少的一个步骤，每加一层反应结束后均要洗涤固相载体板，目的在于防止重叠反应引起的非特异性吸附。 ---常用的洗涤液为：0.02M，pH7.2(或7.4)的PBS(含NaCl