ATP 和其它腺昔酸对毛竹脱氧核糖核酸酶的抑制作用.PDF

Vol. 16 No.4 第 16 卷第4 期 南京林业大学学报 1992 年 12 月 Journal of Nanjing Forestry University Dec. 1992 ATP 和其它腺昔酸对毛竹 脱氧核糖核酸酶的抑制作用 陆宪辉 (林学率) 摘要毛竹脱氧核糖核酸晦(DNase) 活力能被 ATP 和其它一些腺普酸抑制。它们对 毛竹DNase 的抑制程度是 ATP=ADPAMP其它腺苦酸。ATP 是竞争性抑制剂;在 pH4.8 条件下，变性的小牛胸腺 DNA 的 Km 值和 O. 5μmol ATP 的 Ki 值分别为 28.57 晴和 O. 3μmol (l 73.67μg) 0 ATP 能以同样程度抑制毛竹 DNase 对单股小牛胸腺 DNA、双股，j 、牛胸腺 DNA 和酵母 RNA 的水解。 关键词 毛竹笋;脱氧核糖核酸酶;腺喋吟杖斗辛酸;抑制作用 中图分类号 Q523 许多植物酶的活力是被细胞内一些小分子物质的浓度所调节的旧。虽然目前对生物合成 和能量产生途径中一些酶的控制已有所研究，但是对植物细胞内与核酸节约有关的核酸水解 酶活力的调节却很少研究。植物 DNase 是核酸代谢的主要酶类之一，它可以催化 DNA 链的磷 酸二醋键的水解，但它也可以参加 DNA 的合成[飞 DNase 现已从木本植物毛竹笋中被分离纯 化和鉴定了宫的特性【幻。因此，查明一些化合物对这种 DNase 活力的调节是有理论和实际意义 的。本文主要报道 ATP 和其它腺背酸对毛竹 DNase 的抑制作用，为调节这种酶活力和控制核 酸代谢提供参考。 1 材料与方法 1.1 DNase 的提取 挖取的毛竹(Phyllostachys JlI1hescens) 笋(50 cm 左右)洗净，除去笋算，切下幼嫩部分 250 g ，在 匀浆器中用含有 50 mmol 琉基乙醇的 0.05 mol 醋酸纳-醋酸缓冲液(pH4. 的匀浆。匀浆液通过 三层纱布过滤。滤液在 8000 r • min- 1 DNase 提取液 下冷冻离心，除去沉淀物，上清液为粗的 (360 mL)。 1. 2 DNase 的部分提纯 1. 2. J 硫酸钱分离 上清液中加入硫酸接达50% 饱和度，搅拌25min ，混合液在8000 1 r • min- 下冷冻离心 30 min ，除去沉淀物。在上清液部分加入硫酸接达 80%饱和度，搅拌和离 收稿日期 1991-06-12 \992 年(总第 51 期) 陆宪辉:ATP 和其官腺背酸对毛竹脱氧核糖核酸酶的抑制作用 91 心，收集蛋白质沉淀物，溶解在 20 mL O. 05 mol 醋酸铀醋酸缓冲液(pH4.8) 中。 1. 2. 2 Sephadex G~ 100 柱层析 20 mL 蛋白质溶液在预先用 0.05 mol 醋酸铀ι 醋酸缓冲液 (pH4. 的平衡的 Sephadex G~ 100 柱(20X65cm)上脱盐和部分纯化。柱子用同样缓冲液淋洗，流 1 速为 30mL.h- 。合并活性部分 O 1.3 DNase 活力测定 DNase 活力测定基本上参考前文【11 。反应混合物含有 O. 05 mL 30 mol 琉基乙醇、 1 mL 放