G2期后期染色质结构及染色体.PDF

遗传学报，14(3);237-242,1987 Acta Genetica Sinica G2期后期染色质结构及染色体 高级结构形成的研究’‘ 衡红强 陈文元 （四川大学生物系，成都） 用适量 BrdU 处理中华大蟾赊外周血淋巴细胞，能以较高频率得到形态多样的染色质 体（）结构。本文以两栖类和人类细胞为材料，采用Feulgen染色、Ag-NOR染色、DAPI荧光 染色及放射自显影等方法，证实了其染色质性质，初步讨论了其产生原因，并将其命名为：G2 期后期染色质”。在此基础上，进一步从形态学角度初步分析了从 G：期后期到M期染色质 转变为染色体的动态过程，提出不同染色体形成其高级结构是非同步的，有可能存在染色体包 裹顺序的设想。 关键词：染色体一高级结构;5-澳脱氧尿嚓咤泡 裹顺序；G：期后期染色质 自1848年 Hofmeister发现染色体并由 Waldeyer于 1888年命名以来，人们描述 了染色休在细胞分裂过程中的行为，基本搞清了其化学组成。 特别是核小体模型的建 立3,〔7,10]，极大地推动了染色体结构的研究。 近年来不仅采用了超薄切片技术和整体染色 体扫描电镜的观察 2〔‘，，还用多种理化因子处理中期染色体，研究了不同离子强度及不同温 度对染色体结构的影响；讨论了蛋白质、RNA 与中期染色体结构组成的关系4【,11]。但 是，由于方法学上的原因，对于染色体高级结构的形成过程，还缺少研究。 作者在研究两栖类染色体时提出了一种在光镜下研究染色体高级结构及其形成的方 法，并初步描述了多种类型的染色质结构11〔。我们发现，培养的外周血细胞经B’rdU处理 后，可以较高频率观察到单位线结构以及中期染色体过渡相1,〔21，同时还可得到大量形态 多样的着色结构。后者多以“片状”或 “束状”方式存在，完全无法区分单个染色体。本文 进一步研究了其性质，并对蟾蛛染色体高级结构形成过程进行了讨论。 材 料 和 方 法 一（）细胞培养、BrdU处理和染色体标本制备： 中华大蟾螃 (Bufobufoearparizans)捕 白成M}Fr;}＿ 人V}R;,nh单}-T--fimwA ，、。～～。 、 ，－ －一，一 。一 。－－－－－－，一 工 JIfJJ--,～ 曰尸产二‘户 卜p /- 行屯J 户砂勺衬尸洲，— ．J一／、 医院。 培瘾 组成、细胞培养步骤参见文献6［]。在26--28℃条件下培养68小时后，用脱 氧胸腺嚓咤核昔阻断培养细胞的DNA复制。20小时后换至新鲜培养基继续培养，并在 收获细胞前加人5-澳脱氧尿啥咤核昔 (BrdU)。制片前0.5小时用秋水仙胺处理，直至收 本文于1986年3月1日收到。 1）本文曾在中日动物染色体讨论会上宣读。施立明研究员提出宝贵意见。该工作还得到王子淑、王喜忠、赵西林 等同志的帮助，在此一并致谢。 ”只 溃 传 学 报 14卷 获细胞。 采用低渗、固定、空气干燥常规制片法。染色体标本用1:10Giemsa磷酸盐缓冲液 (pH6.8)染色7-10分钟，冲洗、干燥、镜检、摄影。 二（）性质鉴定实验 1．孚尔根染色 根据 Feulgew-Rosserbeck方法改进。 将片龄 110天的标本于 60OClNHC1中温育30--40分钟，用蒸馏水漂洗后，放人 5chiffs试剂染色1小时。用亚 硫酸水溶液洗3--5次 1（0并偏重亚硫酸钾5ml,HC15ml、水90m1混合配制）。对照组 不经 HC1处理。 2．放射自显影术 培养24小时后，加人3H-TdR(1pCifml)继续培养48小时。收 获细胞，制片。涂布4号核子乳胶，密封后置4℃冰箱曝光10-15天，显影后用 Giemsa 磷酸盐缓冲液 (pH6.8)染色1小时。 3.DAPI染色 4（,6-Diamidino-2-phenylindol） 标本在Mellvaines液中处理 5 分钟 P（H7.0)，在 DAPI溶液中染色10--20分钟 (IOpzgDAPI溶