Minute TM 胞质胞核分离试剂盒 - 英文特生物技术.PDF

Invent Biotechnologies, Inc. MinuteTM 胞质胞核分离试剂盒 目录号：SC-003 描述： Minute TM 胞质胞核分离试剂盒由胞浆提取缓冲液，胞核提取缓冲液和离心管柱及2.0ml 收集管组成。本试剂 盒可以快速的从动物细胞/组织，原生质体（植物，细菌，酵母，真菌）中分离胞浆和胞核蛋白。操作时间小 于15 分钟。 应用： 可应用于SDS，immunoblottings ，ELISA ，蛋白定位，凝胶迁移分析，2-D 等其他应用。可快速获得天 然胞浆和胞核蛋白。 试剂盒组分 1. 25ml 胞浆提取缓冲液 2. 25ml 胞核提取缓冲液 3. 50 个离心管柱 4. 50 个收集管 运输：常温运输 储存：4 oC 保存 重要产品信息 蛋白酶抑制剂不是必须加入，但是如果下游实验需要较长时间或者蛋白提取后保存较长时间， 建议添加蛋白酶抑制剂到胞浆裂解液中。胞核提取缓冲液中含有300mM 盐，对于某些下游应用， 可能需要稀释或者脱盐操作。推荐使用 BCA （Pierce）试剂盒用于蛋白浓度测定。研究蛋白磷 酸化，磷酸酶抑制剂应在使用前加入裂解缓冲液。 1 Tel ：4006468368 Email ：support@ 英文特生物技术 （北京）有限公司 Invent Biotechnologies, Inc. 所需附加材料 1XPBS 涡旋震荡仪 台式离心机 BCA 蛋白定量试剂盒（Pierce, Cat # :23227） 微型管杵（RPI, Cat #: 199222XX, 299220） 操作方法： A ．悬浮细胞样品（包括植物，细菌，酵母和真菌制备的原生质体） 1.500Xg ，3 分钟低速离心收集细胞，用预冷的PBS 清洗一次 2.将细胞转移到1.5ml 离心管中，3000rpm 离心1-5 分钟，弃去上清。 3.按表格1 加入适量的胞浆提取缓冲液 （请注意样品及裂解液的比例，以达到最佳效果）,涡旋大力震荡15 秒, 冰上孵育5 分钟,混匀.接转胞质胞核分离步骤。 表格1 ，不同细胞体积应加入相应体积缓冲液 细胞体积（ul） 胞浆提取缓冲液（ul） 胞核提取缓冲液（ul） 5 50 25 10 100 50 20 200 100 50 500 250 6 ﹡NIH3T3 和293T 细胞10ul 体积相当于1*10 个细胞 B. 贴壁细胞 1.将预冷的PBS 直接加入细胞培养板，培养皿或培养瓶中清洗细胞两次，吸去上清。 2.按表格 2 将适量的胞浆提取缓冲液均匀的加入整个器皿表面，冰上静置 5 分钟。用吸头吹打几次后转移到 预冷的1.5ml 离心管中。涡旋大力震荡15 秒。接转胞质胞核分离步骤。 （请注意样品及裂解液的比例，如浓 度较低请减少裂解液使用量） 表格2 ，不同贴壁细胞量应加入相应体积缓冲液 器皿 胞浆提取缓冲液（ul） 胞核提取缓冲液（ul） 24 孔板 80 25 6 孔板 300 150 25 cm2 培养瓶 600 250 C ．组织样品