- 1、本文档被系统程序自动判定探测到侵权嫌疑,本站暂时做下架处理。
- 2、如果您确认为侵权,可联系本站左侧在线QQ客服请求删除。我们会保证在24小时内做出处理,应急电话:400-050-0827。
- 3、此文档由网友上传,因疑似侵权的原因,本站不提供该文档下载,只提供部分内容试读。如果您是出版社/作者,看到后可认领文档,您也可以联系本站进行批量认领。
查看更多
SOP-SC-011-01 白细胞样本分离操作规程
最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01
上海生物样本库
最佳实践规范及标准操作流程
文件汇编
(第二版)
2010年5月
最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01
上海生物样本库
质量管理体系文件
文件名称 白细胞样本分离操作规程 编号 SOP-SC-011-01
批 准 人 批准日期 实施日期
白细胞样本分离操作规程
1.目的
规范血液样本采集后,使用密度梯度离心法分离白细胞的操作规程。
2.适用范围
本规程适用于从使用抗凝剂的全血中分离白细胞,分离后的白细胞标本可用
于细胞培养、染色、核酸抽提等研究。
3.定义和术语
3.1 血浆
血浆是离开血管的全血经抗凝处理后,通过离心沉淀,所获得的不含细胞成
分的液体,其中含有纤维蛋白原。
3.2 白细胞
白细胞是血液中的一类细胞,人体血液及组织中的无色细胞,有细胞核。根
据形态特征可分为粒细胞、淋巴细胞核单核细胞。
3.3 淋巴细胞分离液
淋巴细胞分离液具有低粘度、低渗透压、无毒等特点,密度为1.077g/L,可
基于密度梯度离心的原理分离血液单个核细胞(包括淋巴细胞和单核粒细胞)。
3.4 二甲基亚砜 DMSO
二甲基亚砜 DMSO 一种透明、无色、无臭、呈微苦味的液体,毒性极低。可
作为冻存剂广泛地应用于各种细胞的低温保存。
3.5 RNAlater
RNAlater 是一种样品储存液,采样后将样品浸入这种溶液中,RNAlater 可
以迅速渗透到组织或其他生物样本中,稳定并保护RNA完整而不被降解。
3.6 程控降温仪
1
最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01
在细胞冻存的过程中,液态水转化为冰,冷冻速率太快或太慢,容易导致细
胞内水分丧失或形成大冰晶,都不利于细胞存活。通过使用程控降温仪,选择合
适的冻存液,设定合适的升降温速率,可有效地克服上述不利因素。每分钟1-3
℃的冷冻速率可大大提高冻存细胞的存活率。
4.职责
4.1样本管理员
对抗凝血进行白细胞分离。
5.设备和器材
5.1 个人防护装备
手套、口罩、实验防护服、护目镜及其它相关防护装备。
含有漂白剂的废液缸。
5.2 容器
无菌可立冻存管、离心管、玻璃移液管及玻璃吸管。
5.3 仪器设备
与离心管配套的高速水平吊篮式冷冻离心机。
移液器及无菌的枪头。
超净工作台。
程控降温仪。
5.4 试剂
75%医用酒精、无菌细胞培养液 (RPMI1640)、淋巴细胞分离液 (Ficoll)、
二甲基亚砜(DMSO)、胎牛血清(FCS)、RNAlater试剂及PBS(新鲜配制)。
冻存剂保护液的配置:分离白细胞前,预先配置冷冻的冻存剂保护液(10%
DMSO + 20% FCS + RPMI1640)。
6.主要流程
6.1 白细胞分离
6.1.1血液样本采集的过程请参见《血液样本采集操作规程》中的具体流程。
6.1.2 分离血浆的过程参见《血浆样本分离操作规程》,与此同时淋巴细胞
分离液和细胞培养液RPMI1640预热至室温。
2
最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01
6.1.3提取
文档评论(0)