Thermo Scientific μDrop Plate 对微升量的核酸进行浓度测定.PDF

Thermo Scientific µDrop Plate 对微升量的核酸进行浓度测定 SPA Application Laboratory, Thermo Fisher Scientific, Vantaa, Finland 本文描述了如何用Thermo Scientific µDrop Plate 对 样品不纯导致的高背景结果，可通过测定样品在 微量核酸进行分光光度法定量，及可能影响光吸收测 特定波长处的吸光值进行校正。在此波长处，核酸和 量结果的不同性能参数和仪器相关性能。 蛋白质的吸光值应接近 0 。最常用的背景扣减波长为 320nm；相应的经过背景扣减的公式为（Abs 260-Abs320 引言 /Abs280 –Abs320 ）。比如，现在常用磁珠进行核酸纯化， 紫外分光光度法已成为样品中核酸定量的常用方 当用磁珠法纯化时，通常推荐将 320nm 作为扣减波 法。因为 DNA 和 RNA 都有高效吸收紫外光的特性，据 长。 此可检测并对核酸浓度定量。最典型的应用，如，在 通常可用来定量的样品量非常少，因此需要有一 测序或 PCR 检测前需要对模板定量。 种可对微升级的样品进行检测的工具，针对这一需 本文以 dsDNA 为例。 求，我们推出了 µDrop TM Plate 。 朗伯- 比尔 （Lambert-Beer’s ）定律是吸光光度法的 µDrop Plate 有两个独立的检测位置，一个是微 基本定律，吸收紫外光的性质是核酸中的含氮碱基所 量样品检测区，另一个是比色杯检测区（图 1）。 具有的，它们在约 260nm 处有最高吸收峰。 -1 -1 dsDNA 的平均消光系数为 0.020 （µg/ml ） cm 。 这说明当 dsDNA 在 260nm 处的吸光值为 1.0 时，浓度 为 50µg/ml。因此可用下面的公式计算 DNA 的浓度： DNA 浓度（µg/ml ）=Abs260*50 µg/ml 图 1. µDrop Plate.左侧为有 16 个检测位的微量样品检测区，右 侧为 10mm 标准比色杯的检测区。 蛋白质由于含有色氨酸，因此也能吸收紫外光， 微量样品检测区有两个石英载片，分别为顶部的 通常蛋白质的吸收高峰在 280nm 波长处。因此， 透明石英载片和底部的由聚四氟乙烯部分涂层的石 Abs260/Abs280 比值可用来评价蛋白污染。高质量核酸的 英载片。底部载片有 16 个以 2 ×8 的矩阵形式排列的 Abs260/Abs280 应在 1.8-2.0 之间，如果小于 1.8 表示有蛋 检测位，可在检测位上加样。比色杯槽用于放置标准 白污染，高于2.0 表示可能有污染，如酚类物质。 比色杯进行光吸收检测。 描述 DNA 纯度的另一个常用参数为Abs260/Abs230 比值，