丁型肝炎病毒核酶的结构特点与催化作用机制.PDF

第23卷第8期 CHINA BIOTECHNOLOGY 2003年8 月 * 1 1 2** 孟 斌 温博贵 韩金祥 (1 汕头大学医学院病理系肿瘤分子生物学研究室 汕头 515031 2 山东省医药生物技术研究中心 卫生部生物技术药物重点实 室 济南 250062) (HDV), 。, ,HDV (general acid2base catalysis),。HDV , , 。 HDV RNA 丁型肝炎病毒(hepatitits delta virus,HDV)核酶 接区(J1P2、J1P4 和J4P2) 组成:P1 区为核酶与底物 有基因组型(genome ribozyme) 和反基因组型(anti2 结合并进行切割的部位, 位于切割位点+ 1位的G# genome ribozyme)两种类型, 分别位于HDV 的基因 U 摆动对(wobble basepair) 高度保守,其余6个碱基 组和反基因组, 与锤头状、发夹状和VS核酶同属小 则是非特异性的;L3 区、J1P4 区和J4P2 区与核酶的 [1] 核酶 。HDV 是目前发现的唯一一种在人体细胞 活性紧密相关,其大部分碱基不可随意变动; 而P3 内具有天然核酶活性的动物病毒, 由约 117kb 组 区只要保持碱基配对即可保持酶的活性; P2 区可 成, 为缺陷型环状RNA 病毒,其复制是通过滚环机 能仅与稳定核酶的高级结构有关; P4 区在去除一 制进行的RNA 指导的RNA 复制,HDV 核酶则将复 部分碱基后核酶的活性不变, 说明其非切割活性所 [2] 制产生的长链RNA 剪切成单位长度 。改建后的 必需。 HDV 核酶对异源RNA 也能产生切割作用。HDV 根据假结样假说和碱基突变得到的研究结果, 核酶结构复杂, 稳定性好, 并且完全适应人体细胞 对HDV 核酶进行改建,使P1 区的5c端序列和J1P2 的内环境,这些特性使其在基因治疗方面具有更大 的一部分缺失,并去掉P4 一部分碱基对,便构建成 [3] 的开发潜力。HDV 核酶晶体结构的揭示 ,不仅证 了具有反式切割活性的HDV 核酶( 图1) 。体外研 实了其假结样结构假说, 而且还有一些新发现, 对 究发现只要选择适当的位点, 反式作用核酶可以切 其催化机制也有了比较深入的认识。 [5, 6] 割其它来源的RNA 片段 。 112 HDV 1 HDV [3] 1998 年,Ferrˆ2DcAmarˆ等 用X 线衍射技术在 111 HDV 213AÜ分辨率下揭示了HDV 基因组核酶的晶体结 两种野生型HDV 核酶各由约85nt 组成, 虽然 构,不仅证实了假结样结构假说, 而且还发现了由 在碱基组成上有所差异, 但其立体结构却极为相