利用AQUA稳定同位素和化学等价内标实现生物标志物的-Waters.PDF

技术简报 利用AQUA稳定同位素和 化学等价内标实现生物 标志物的MRM绝对定量 目的 利用Xevo TQ-S 以最高特异性和灵敏度检测和 蛋白质混合物的靶向定量分析需要将蛋白 定量潜在的蛋白质生物标志物。 质酶解与准确定量蛋白质的策略相结合， 以获得特异性高、灵敏度高、动态范围宽、 重现性和稳定性出色的结果。Xevo® TQ-S系 解决方案 统在仪器性能方面表现卓越，能够使用稳 本文研究了使用AQUA稳定同位素和化学等价内标对溶液、合成基质和 定同位素肽作为内标实现高准确和高灵敏 福尔马林固定石蜡包埋组织样品中的蛋白质进行定量分析的适用性。 的蛋白质定量。 本文还通过实验研究了检测限(LOD)，所用的样品是向合成基质中加标 氨基酸序列中间额外插入了一个甘氨酸的钙周期素肽。利用AQUA稳定 同位素肽作为内标测定了MRM分析的线性和蛋白质浓度。基于Waters® TRIZAIC UPLC系统，nanoTile™技术与Xevo TQ-S质谱仪进行肽段的分离和定量。 背景 采集数据时采用时间设定的MRM采集模式并由TargetLynx™应用软件进行 蛋白质生物标志物验证/确认的初期和后 定量分析。 期阶段，基于多反应监测(MRM)/单反应监 测(SRM)的定量分析方法比基于生物化学 的蛋白质定量方法(例如ELISA)具有更快的 分析速度和更低的成本优势，因而被认为 是更具有吸引力的替代方法。此类研究对 LC/MS系统有着极高的性能要求，即必须需 要最高的灵敏度、特异性、分析速度，以 及稳定性，能够对样品中的目标蛋白质进 行定量的分析。正因如此，技术改进不可 或缺。本文介绍了Xevo TQ-S和TRIZAIC UPLC® 系统的应用，还介绍了定量分析福尔马林 固定石蜡包埋的胎盘样本中与子痫前症相 关的calcyclin定量的结果。 13 15 图1.LQDAEIAR、插入了甘氨酸的化学等价LQDAGEIAR和AQUA标准品LQDAEIAR- C, N 的 6 4 碎片离子谱图。 *MRM定量的候选碎片离子。 技术简报 图1展示了MRM定量的候选Calcyclin肽段碎片例 图3展示了其中一条AQUA稳定同位素肽段的MRM定量曲线，其线性定量 子之一以及两种可能的内标等价物的碎片离 动态范围覆盖了四个以上数量级。为测定Calcyclin的水平，将两种稳定 子谱图。插入了甘氨酸的化学合成等价物表 同位素AQUA肽段加入至约300个显微切割的滋养细胞和基质细胞的酶解 现出与目标内源性肽相似的电离、碎裂和色 物中。图3显示了内源性肽及对应的AQUA稳定同位素重标肽的MRM通道。 谱特性。我们将内源性肽段标准品加入至合 含量测定结果为每个滋养细胞和基质细胞分别含约0.3埃摩尔和7.0埃摩 1 成基质中，用以评价MRM分析的检测限，结果 尔，证实了此前报道的结果 。 表明可实现低至埃摩尔级的柱上定量，如图2 所示。