利用组织切片和染色(staining).ppt

PAS反应1)切片二甲苯①脱蜡10分钟.2 )切片二甲苯②脱蜡10分钟.3 ) 无水酒精①5分钟.4 ) 无水酒精②5分钟.5 )蒸馏水洗6 ) 1%过碘酸 5-10分钟7 ) 蒸馏水洗8 ) schiff 试剂 30分钟9 ) 水洗10 )苏木精1分钟.11 )水洗12 ) 1%盐酸酒精分色数秒13 )自来水洗14 ) 饱和碳酸锂1-2分钟15 )自来水洗16 ) 95%酒精①5分钟.17 ) 95%酒精②5分钟.18 ) 无水酒精①2分钟.19 )无水酒精②2分钟.20 ) 二甲苯①5分钟.21 )二甲苯②5分钟.22 ) 中性树胶封片.结果：胞浆内呈紫红色颗粒 结构即糖原颗粒。 ⒉ 透明剂 常用的透明剂有二甲苯、笨甲酸甲脂、三氯甲烷和冬青油等，以二甲苯最为常用。 二甲苯 为无色透明的液体，易挥发，长期接触对呼吸道粘膜有较强的刺激作用。二甲苯透明能力强。但组织在二甲苯中浸泡时间过长时较易发生过度收缩和脆化现象。用二甲苯透明时，小块组织20分钟至1个小时，大块组织可适当延长时间。如果组织块在透明时呈白色浑浊不透明状态时，则为脱水不彻底所致。此时应返回重新脱水。 苯甲酸甲脂 为无色透明的液体，易挥发，透明能力强，对组织块的收缩和脆化的影响较小。透明时间12--24小时。组织块经各级乙醇至95%浓度脱水后可直接入苯甲酸甲脂透明。由于苯甲酸甲脂可溶解火棉胶，也可用于火棉胶切片的透明。 三氯甲烷 也称氯仿，无色透明的液体，极易挥发，透明能力较差，透明时间可长达24小时，但氯仿不易使组织收缩和变脆。目前广泛用于火棉胶胶块的透明。 （五）包埋 用石蜡做支撑剂将组织包埋成块使其硬化以利于切片的过程称作包埋。在石蜡包埋前还需一个浸蜡的过程。 ⒈ 浸蜡 组织经过透明后，用石蜡作为渗入剂渗入组织内部以置换组织内透明剂的过程称作浸蜡。组织浸蜡的过程必须在恒温箱中进行。 用于组织块浸蜡的石蜡分为低溶点蜡和高溶点蜡。低溶点蜡溶点在48℃～50℃，也称软蜡；高溶点蜡溶点在60℃～62℃，也称硬蜡。因此，浸蜡的恒温箱相应地分为软蜡箱和硬蜡箱两种：软蜡箱的温度控制在52℃～54℃之间，组织浸蜡时间一般可达2～4小时；硬蜡箱的温度控制在62℃～64℃之间，组织浸蜡时间一般不超过1小时。组织块浸蜡的成功与否与温度和时间有很大的关系，温度愈高，时间愈长，则组织块的收缩愈大，脆化愈明显。 ⒉ 包埋过程 组织浸蜡完成后，接着进行组织块包埋。用于包埋的是硬蜡。使用前须在恒温箱中多次溶化，利用热胀冷缩的原理挤出原石蜡里的空气，再加入一定数量的（约十分之一）蜂蜡（或旧蜡）相混合，提高石蜡的密度和粘度，以使切片时便于形成完整的蜡带。蜂蜡也称黄蜡，是一种动物蜡，溶点约在54℃，粘滞度比石蜡高。 组织块包埋一般采用包埋框来进行，包埋框由两块“L”型的金属框和一块金属底板相对拼合而成。包埋组织时应注意将组织块的切面朝下放平，包埋镊应加温后使用。组织包埋好后，应等石蜡凝固后才可将包埋框打开。修整蜡块时，组织块应距蜡块边缘2～3毫米，以利于连续切片。 ① ② ③ ④ 包埋过程 ①包埋石蜡；②浸蜡石蜡； 将组织块从浸蜡蓝中夹出来； 将组织块置入包埋器中。 （六）切片 用石蜡作为包埋剂制作的切片称为石蜡切片，是组织切片中应用最为广泛的一种切片，其优点是易于制作大量菲薄的组织标本，而且石蜡包埋块又可长期保存。 ⒈ 仪器及器材准备 切片机；切片刀； 恒温水箱式摊片仪； 镊子；粘片剂； 中号羊毫毛笔； 经过清洁处理的载玻片等。 ⒉ 切片过程 调节水温至47℃左右； 固定蜡块； 修整包埋面； 调节切片厚度至4～6微米； 切片； 摊片； 烤片。 ⒊ 切片的注意事项 A．切片前要将切片机各部位的螺丝旋紧，否则会引起切片机各部件震动，造成切片厚薄不匀； B．组织块的切面和切片刀的倾斜度之间的夹角应按切片机刀台上的刻度作适当调整； C．恒温水箱的温度应比包埋蜡的溶点低5℃～6℃； D．环境温度高时蜡块容易变软，应使用冰块使蜡块的表面迅速冷却，以增加蜡块表面的硬度。 （七）染色 ⒈ 染料简介 染料是指分子中含有发色团和助色团的有机化合物，有鲜艳的色彩，对于组织有极强的亲和力。 根据来源可分为两类： 天然染料（卡红、苏木