细胞化学染色法.ppt

细胞化学染色 一、概念 细胞学和化学相结合的一门科学。以细胞形态学为基础，结合运用化学反应原理对血细胞内的各种化学物质（酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。 二、临床应用 辅助判断急性白血病的细胞类型 仅从细胞形态学观察白血病的诊断正确率约50-70%，如结合细胞化学染色则可提到90%以上。 辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断 观察疾病疗效和预后 发病机制的探讨 三、基本步骤 固定 显示 复染 固 定 目的：保持细胞结构及化学成分不变。 方法： 物理法 干燥、火焰固定 化学法 蒸汽固定、液体固定 （甲醛、乙醇、丙酮等） 显示 偶氮偶联法 联苯胺法 普鲁士蓝反应 雪夫反应 金属沉淀法 复 染 目的：使各种细胞显示出来便于观察 染核：中性红、甲基绿、苏木精、核固红、沙黄等 染浆：伊红、刚果红、光绿等 四、种类 过氧化物酶染色、苏丹黑染色、 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应 α-醋酸奈酚酯酶染色 酸性磷酸酶染色 铁染色 过氧化物酶染色(POX) 过氧化物酶： 是中性粒细胞含量最多的一种酶 主要存在于线粒体和溶酶体中 主要功能是破坏生物氧化过程中有剧毒的过氧化物，使其放出氧，参加细胞内氧化还原过程。 苏丹黑染色 原理：能溶解于细胞内含脂结构中，使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色。 正常细胞的染色反应　同（ＰＯＸ染色） 临床评价 ＰＯＸ染色特异性高于ＳＢＢ染色 ＳＢＢ染色敏感性高于ＰＯＸ染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色（ＮＡＰ） 原理：中性粒细胞胞质中的碱性磷酸酶在PH9.6的碱性条件下能水解磷酸奈酚钠底物，生成奈酚，后者与偶氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀定位于胞质中的酶活性处。 中性粒细胞碱性磷酸酶染色（ＮＡＰ） 原理： 　　　磷酸奈酚钠底物 　　　　PH9.6 　　 碱性磷酸酶 　　(中性粒细胞胞质中) 　　　奈酚+偶氮盐 　　　(有色沉淀) 过碘酸-雪夫反应 原理： 　　　　　　乙二醇基（多糖类物质中） 　　　　　　　　过碘酸 　　　　　　双醛基＋无色品红 　　　　　　　　　紫红色化合物 正常血细胞染色反应 粒细胞系统 　　原粒（可为阴性）　　分叶（阳性程度逐渐增强） 　　嗜酸胞质呈红色,颗粒不着色 　　嗜碱反之 红细胞系统 阴性 单核细胞系统 原单（可为阴性）,其他为阳性。 临床评价 红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中幼红细胞可阳性（均匀红色或块状） 白细胞系统疾病： 急淋：（原幼淋细胞阳性率升高，呈粗颗粒或块状） 急粒：少数原粒呈阳性 急单：可呈阳性 α-醋酸萘酚酯酶染色 原理 α-醋酸萘酚 PH中性 α-醋酸萘酚酯酶 α-萘酚+重氮盐(坚牢蓝B) (黑色或灰黑色) 其他脂酶染色 氯乙酸AS-D奈酚脂酶染色 几乎仅出现在粒细胞、特异性高。 临床意义： 急性粒细胞白血病有一定数量白血病细胞阳性，可以肯定白血病细胞中有粒系成分，阴性不排除急粒。 酸性磷酸酶染色 原理： 偶氮偶联法： Gomori硫化铅法 抗酒石酸酸性磷酸酶染色 铁染色 1、原理： 铁+亚铁氰化钾 酸性环境 亚铁氰化铁（兰色） 细胞外铁 细胞内铁 疾病的鉴别 类白血病反应　　慢性粒细胞性白血病 细菌性感染　病毒性感染 急粒　急淋　 恶性淋巴瘤　恶性组织细胞病 5. 恶性组织细胞病　反应性组织细胞增多症 6. 真性红细胞增多症　继发性红细胞增多症 原发性血小板增多症　继发性血小板增多症 8. 再生障碍性贫血 阵发性睡眠性血红蛋白尿 淋巴：大多阴性，少数阳性。 巨核及血小板：阳性 M5 PAS(+) AML-M6 AML-M7 M7 PAS(+) 正常血细胞的染色反应 单核细胞、粒细胞、淋巴细胞（均可+） 单核细胞的阳性可被氟化钠抑制。 氟化钠抑制率=抑制前的阳性率/积分-抑制后的 抑制前的阳性率/积分