如核酸与蛋白质、蛋白质与氨基酸.PPT

* * 组织化学技术概述 组织学与胚胎学教研室 孟运莲 教授 提纲 一、组织化学的定义 二、组织化学的研究概况 三、组织化学研究的内容 （一）酶 （二）多糖 （三）脂肪 （四） 核酸 （五） 蛋白质 一、组织化学的定义 组织化学是运用物理学、化学、免疫学和分子生物学等原理与技术，对组织与细胞的化学成分、化学反应及其变化规律进行定性、定位和定量研究的科学。 随着科学技术的不断发展，组织化学在近几十年来已经得到了迅速的发展，产生了许多分支，如核酸与蛋白质、蛋白质与氨基酸、脂类与蛋白质、碳水化合物与粘蛋白及粘多糖、无机物组织化学、酶组织化学、电镜组织化学、荧光组织化学、免疫组织化学、同工酶组织化学、定量组织化学、原位杂交组织化学和放射自显影技术等。因此，现代组织化学的概念已经大大的超过了以往的范畴，无论从理论、内容、研究手段和研究范围都比以往更广泛及更深入。 二、组织化学的研究概况 光镜组织化学技术(light microscopic histochemical techniques) 所显示的组织化学物质，是呈色反应(staining reaction)，呈色反应的强或弱，表示组织细胞内化学物质含量的多少。光学显微镜下所见的组织化学呈色反应也称阳性反应(positive reaction)。 酶组织化学(enzyme histochemistry)，所显示酶的呈色反应的强或弱，也称酶活性反应(enzyme active reaction)。 电子显微镜组织化学技术(electron microscopic histochemical techniques)，是在电镜下观察所显示的化学物质，以电子密度(electron density)高或低来表明其含量。 光镜和电镜组织化学，均可对所显示的化学物质进行定位、定性和定量观察。 三、组织化学研究的内容 酶类、糖类、脂肪、核酸、蛋白质等 （一）酶 酶（Enzyme）是具有催化功能的一种特殊蛋白质，人体的各种机能活动都与酶的活性有密切关系。有些酶是单纯蛋白质，仅由氨基酸组成，如一些水解酶；另一些酶是结合蛋白质，它们在分子组成中，除氨基酸外，还含有金属离子或其它小分子的有机化合物作为酶的辅基。 1．酶的分类 水解酶 即催化水解反应的酶，它们是藉水的有或无以催化水解底物的反应。如磷酸酶、酯酶、肽酶等。 氧化还原酶 是催化氧化-还原反应的酶类。包括脱氢酶、氧化酶、过氧化物酶和单氧酶。其中脱氢酶催化底物脱氢，如琥珀酸脱氢酶；氧化酶是直接或间接藉氧催化接受电子的酶，如细胞色素氧化酶。 转化酶 催化功能基团部分分子转移形成另一新化合物的酶。 连接酶 又称合成酶，藉两个其它分子共同结合催化形成新 分子。 裂解酶 促进一种化合物分成两种化合物，或由两种化合物 合成一种化合物的酶类。 异构酶 催化同分异构体的相互转化。 2．酶的组织化学反应法 ⑴ 偶氮染料法 酶的活性使一部分萘酚释放，重氮盐与萘酚结合，形成的反应产物成为不溶性偶氮染料，其显示处即标志出酶的活性所在。重氮盐是原发性芳香族胺与亚硝酸的反应产物经重氮化作用过程所形成。 ⑵ 吲哚酚法 酶活性促使吲哚酚底质释放吲哚基并很快被氧化为不溶性靛蓝最终产物。 ⑶ 金属-金属盐法 金、银、铜、铁、铝和钴等金属盐及其化合物都具有颜色，容易发生呈色反应。酶的分解产物和金属一般都可以结合。因此，酶的活性可使孵育底物分解，其生成的基团与金属离子结合而沉淀，最后使酶的活性所在处形成不溶性的有色盐。 ⑷ 氧化-还原反应法 在氧化还原反应后，氢被从某物质移除（氧化作用），转移到另一物质（还原作用）。如氧化酶的显示是酶的活性催化底物将氢转移到四唑盐，使之还原成为非水溶性甲色素于该酶活性所在处。 ⑸ 色素形成法 色素形成法是显示酶定位的反应法。 3．介绍几种常用的酶组织化学 ⑴ 酸性磷酸酶（Acid Phosphatase, ACP） 广泛分布于机体组织中，它主要位于溶酶体中，也有少量在内质网中。巨噬细胞、前列腺、空肠上皮纹状缘、肝、脾、肾及肾上腺等尤为丰富。 Holt与Bitensky改良磷酸铅法 作用原理 在酸性pH值的情况下，给切片加入甘油磷酸酯（或任何磷酸单酯），如有碱性磷酸酶，则释放磷酸酯，后者与高浓度的Pb2+结合，形成无色的磷酸铅，经硫化胺（或硫化氢）作用，磷酸铅转变为黑色硫化铅： 甘油磷酸酯