广西壮族强直性脊柱炎患者HLA-B27的检测.pdfVIP

广 西 医 科 大 学 学 报 JOURNAL OF GUANGXI MEDICAL UNIVERSITY 2007 Dec；24(6、 ， · 928 · RSI 广西壮族强直性脊柱炎患者HLA—B 的检测 陈志坚 李 山 (广西医科大学第一附属医院临床医学实验中心 南宁 520021) 强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)的病因和发 2 结 果 病机制尚不清楚，是一种类风湿因子阴性、累及中轴关节和 肌腱韧带骨附着点的慢性炎症性疾病。研究表明，人类白细 AS组和对照组分别采用 2种检测方法检测 HLA_B2 ， 胞抗原B2 (HLA—B2 )与 AS密切相关口]。本文用聚合酶链 结果见表1。 反应一序列特异性弓I物(PCR-SSP)法、流式细胞仪法，对 65 表1 2种方法检测HLA—B2 阳性结果[ ( )] 例广西壮族AS患者与65例壮族健康体检者进行HLA—B2 检测，旨在探讨2种检测方法的特点，为AS的临床诊断提供 更可靠的依据。 1 资料与方法 1．1 检测对象：AS组均为来自广西各地在我院骨科门诊及 住院治疗的AS患者，共 65例，壮族，其中男48例，女 17例， 平均年龄(28．2土16．2)岁，符合 1984年修订的纽约诊断标 3 讨 论 准。对照组：健康体检者，共 65例，壮族，其中男45例，女 2O 例，平均年龄(29．1±17．1)岁。 AS病变主要累及骶髂关节、脊柱、脊柱骨软组织及四肢 1．2 检测方法 关节，严重者可完全丧失劳动能力，减少致残率的关键在于 1．2．1 PCR-SSP法：取患者静脉血 0．3 ml，EDTA抗凝，按 早期诊断、早期治疗、早期指导患者生活起居及功能锻炼。 照Genomic DNA Purification Kit的说明书快速提取 DNA。 尽管AS与HLA_B2 的相关性研究取得一定的进展，但不同 每管反应体系为23 l，内含石蜡油5 l，特异性引物 1O l， 地区、民族和人种之间仍存在基因频率的差异。本文采用 Taq DNA polymerase 1 U，PCR缓冲液和 DNA模板的混合 PCR-SSP法、流式细胞仪法对65例广西壮族AS患者进行检 液8 l。置PE9 600DNA扩增仪 。循环参数 ：9 6℃预变性 测，HLA_B2 的阳性率分别为 90．8 、92．3 ，较对照组的 1 min；然后5个循环，96℃ 25 S，70℃50 S，72℃45 S；21个 HLA—B2 阳性率9．2 、9．2 均明显增高(P0．01)，表明 循环，96℃ 25 S，65℃ 50 S，72℃45 S；4个循环，96℃25 S， 在广西壮族地区HLA_B2 与AS有相关性，这与国外报道AS 55℃ 60 S，72℃120 S。终止反应。取PCR产物5 l与上样 患者中HLA_B2 阳性率为85 ～95 ，亚洲正常人群 HLA— 缓冲液1 l混匀，经2 琼脂糖凝胶电泳，电泳缓冲液为0．5 B2 阳性率为5 ～12 l[2 基本相同。本研究中的AS组，男 ×TBE，电压12 V／cm，时间10 min，溴化乙锭染色，紫外灯下 女比例约3：1(48：1 7)，而30岁以下就诊者占81．5 (53／65)，与国外文献报道也基本一致L3]。因为AS患者存在 观察荧光带。 1．2．2 流式细胞仪法：EDTA抗凝的全血标本 100 V-1加1O 一 定比例的 HLA—B2 阴性率，对照组也有一定比例的HLA_ l双标记B27一FITC／B7一PE单克隆抗体，均加入 12 mm×75