实验9 酱油中氨基酸的测定.ppt

实验九 酱油中氨基酸总量的测定—甲醛法（微型滴定） 实验目的 实验原理 实验步骤 注意事项 仪器试剂 问题讨论 数据处理 实验目的 1. 了解酱油的用途及其制备。 2. 掌握酱油中氨基酸含量测定的原理和方法。 3. 学会微型滴定操作。 4. 掌握移液管和容量瓶的使用。 实验原理 氨基酸是一类两性物质，在溶液中以偶极离子的形式存在，不能用直接法滴定氨基酸上的羧基。 氨基与甲醛加成后，由于羟基为吸电子基团，氮原子上电子云密度显著降低，消弱了它接受质子的能力，使氨基的碱性消失，则可用强碱如NaOH来滴定氨基酸的羧基，从而测定酱油中氨基酸的总量。 仪器与试剂 1. 仪器 微型滴定管（3 mL）、容量瓶（100 mL）、移 液管（5 mL、10 mL）、锥形瓶（25mL）、烧 杯、电子天平（0.01 g）、抽滤装置等。 2. 试剂 酱油、HCHO（18%）、NaOH (约0.1mol·L-1)、 活性炭、酚酞指示剂（0.04%醇溶液）、滤纸等 实验步骤 酱油脱色 减压过滤 微型滴定 定容 100 mL 用移液管取10.00 mL酱油，加入4 g活性炭，加热煮沸，脱色（搅拌）10 min。 减压过滤 垫2层滤纸，倾注法过滤，洗涤时每次用水5 mL，洗2-3次。 酱油脱色 定容 将滤液转移至容量瓶中，并洗涤抽滤瓶2-3次，定容至100 mL。  固液分离技术——减压过滤  容量瓶、比色管的使用——定容操作 微型滴定 从容量瓶中吸取5.000 mL酱油稀释溶液，加3d酚酞，用NaOH滴定多余的酸. 再加入中性甲醛 4 mL（18%），放置1 min后，用NaOH滴定，终点颜色为微红色。 主要操作 1. 移液操作 (1) 移液管准备：自来水清洗三次，蒸馏水润洗3次，管壁外的水用滤纸擦干，管内的水用洗耳球吹干。移取溶液时，再用待取液润洗3次。 (2) 取液：右手拿移液管，左手拿洗耳球，将溶液吸至刻度线以上，食指封口。 (3) 放液：减轻食指压力，缓慢将溶液放至刻度处，将移液管口与承接容器轻靠，移液管竖直，承接容器倾斜，将溶液缓慢放至承接容器中（半滴处理）。 2. 定容操作 检漏—洗涤—无损转移—直立混匀—定容 (1) 检漏：容量瓶装满水，倒置、静置 1min。 (2) 洗涤：自来水洗三次，蒸馏水润洗三次。 (3) 无损转移：将溶液无损转移至容量瓶中。 (4) 直立混匀：2/3刻度处，不盖容量瓶盖子摇匀。 (5) 定容：加入蒸馏水至刻度线，摇匀。 3. 微型滴定操作 微型滴定管的使用与酸碱滴定管相似 (1) 洗涤时类似移液管。 (2) 插入塑料尖嘴以减少半滴误差， 尖嘴可重复使用。 (3) 读数时3位小数。 项目 I II III 中和酱油 中其它酸 NaOH滴定的终体积Ve/mL NaOH 滴定的初体积V0/mL NaOH中和酸体积V/mL 氨基酸 滴定 NaOH滴定的终体积Ve/mL NaOH滴定的初体积V0/mL NaOH滴定氨基酸的体积V/mL 氨态氮含量（g·100mL-1） 平均值（g·100mL-1） 偏差 相对平均偏差 数据处理 注意事项 1. 抽滤瓶洗涤干净，抽滤时垫2层滤纸。 2. 洗涤时少量多次，每次用水5 mL。 3. 用小烧杯取NaOH溶液。 4. 甲醛禁止敞口放置，滴一份加一份。 5. 微型滴定管的读数。 6. 移液管和容量瓶的使用。 问题讨论 1. 实验所用中性甲醛为什么呈微红色？ 答：甲醛中常含有微量甲酸，应预先以酚酞为指示剂，用NaOH溶液中和至溶液呈微红色。 2. NaOH为非基准试剂，采用什么方法配制？ 可用什么基准试剂标定？选用何种指示剂？ 答：采用间接法配制。可用邻苯二甲酸氢钾或草 酸晶体标定，选择酚酞为指示剂。 THE END