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HPLC仪的构造、正确使用和科学保养 HPLC的特点 又称为“高速液相色谱”或“高压液相色谱” -- 高速 -- 高效 -- 高灵敏度 HPLC系统的组成 主要部分： 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 高压输液系统 恒压泵，恒流泵输液系统中关键部位 柱塞杆 密封圈 单向阀 进样系统 手动进样器 自动进样器 高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 检测器 紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。 特点： 灵敏度高； 线形范围宽； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。 光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展:光电二极管阵列检测器（1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图） 原理：复合光通过流通池被组分选择性吸收，再进入单样器，分光后照射在二极管阵列装置上，获得组分的吸收光谱。 经过计算机的处理，将每个组分的吸收光谱和试样的色谱图结合在一张三维坐标图上 示差折光检测器 除紫外检测器之外应用最多的检测器 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比 响应特性： 灵敏度低 对温度敏感 不能用于梯度洗脱 荧光检测器 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应； 响应特性： 高灵敏度 高选择性 适合梯度洗脱 岛津LC-2010A HPLC仪的一般操作 1、准备 流动相的配置 配置好后，应该进行减压过滤、脱气 过滤：0.45μm 或更小孔径滤膜，除去溶剂中的微小物理颗粒，避免堵塞管路及色谱柱 脱气:除去流动相中溶解的气体（如O2） 防止其进入检测器时因压力降低而产生气泡（氦气脱气法、抽真空脱气法、加热回流法、在线真空脱气法、超声波脱气） 溶剂过滤器 真空泵 过滤瓶装置：集液瓶、砂芯过滤头、过滤杯以及固定夹 微孔滤膜 滤膜类型：水系、有机系 用途：主要用于色谱分析中流动相及样品的过滤，对保护色谱柱及输液泵管系统和进样阀等不被污染具有良好的作用。 使用过程中，根据所过滤样品选择合适的滤膜。 色谱柱的安装 根据待测样品的需要，更换合适的洗脱柱（注意方向） 样品和标准溶液的配置 需用0.45μm的过滤头过滤 样品盘 2、开机 设定参数 包括波长、流速、流动相比例、柱温的设定 3、更换流动相并排气 将管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中 逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀 Method画面上，按[purge]键 ，依次按下使用的流动相通道和冲洗液通道的功能键 关闭排液阀 气泡对测定的影响: 1.泵中气泡引起液流波动，改变保留时间和峰面积 2.柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3. 检测器中的气泡产生基线波动 4.平衡系统 按泵的[pump]键 泵启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统 观察基线变化 如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。 5、进样 6、清洗柱及进样系统 数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗20min 换用含纯水冲洗系统及色谱柱至少60min，最后用甲醇或乙腈冲洗至少30min。 7.关机 清洗完成后，先将流量降到0，关闭电源开关。  高效液相色谱仪的维护 吸滤头 材料：不锈钢烧结（或陶瓷） 故障：堵塞 表现：管路中不断有气泡生成 措施：用异丙醇（5%的稀硝酸）超声波清洗（10~15min），再用蒸馏水清洗 防止吸滤器堵塞的有效方法 a.若需使用含盐的流动相，使用前务必过滤 b.流动相若为水或含盐的缓冲液，建议现用现配 c.尽量避免溶剂瓶在阳光下暴晒 单向阀 单向阀的清洗 故障：宝石球或球坐受污导致密封不好 表现：系统压力波动大 措施： 打开排液阀，以异丙醇为流动相输液 拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗 注意：超声清洗时开口端向上放置 故障：宝石球粘附于垫片 表现：泵无法吸液或排液，流路不通 措施：1）用针筒抽出口单样阀以产生负压，使宝石球与垫片分开 2）拆下单样阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗 柱塞密封圈的更换 故障：密封圈磨损导致密封不良 现象：系统压力波动大或漏液 措施:更换密封圈 线路过滤器： 故障：堵塞 现象：系统压力偏高 判断依据：关闭排液阀，断开出口管路，设定流速为1ml/min,如果压力大于0.5MPa，则堵塞 措施：异丙醇（或5%稀硝酸） 超