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第四章 高效液相色谱分析法 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第一节 高效液相色谱仪 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第二节 主要分离类型 第三节 液相色谱的固定相与流动相 第三节 液相色谱的固定相与流动相 第三节 液相色谱的固定相与流动相 第三节 液相色谱的固定相与流动相 第三节 液相色谱的固定相与流动相 第三节 液相色谱的固定相与流动相 第三节 液相色谱的固定相与流动相 第三节 液相色谱的固定相与流动相 第三节 液相色谱的固定相与流动相 第三节 液相色谱的固定相与流动相 第四节 影响分离的因素与分离类型选择 第四节 影响分离的因素与分离类型选择 第四节 影响分离的因素与分离类型选择 第四节 影响分离的因素与分离类型选择 阳离子交换：R—SO3H + M+ = R—SO3 M + H+ 阴离子交换：R—NR4OH + X- = R—NR4 X + OH- 一般形式： R—A + B = R—B + A 试样组分与交换基团间的作用力的大小决定色谱的保留行为。 阳离子交换：R—SO3H + M+ = R—SO3 M + H+ 阴离子交换：R—NR4OH + X- = R—NR4 X + OH- 组分与离子交换剂之间作用力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。作用大，保留时间长。 应用：离子及可离解的化合物， 氨基酸、核酸、蛋白质等。 四、离子对色谱 离子对色谱: 用正向或反向色谱柱分离离子和中性化合物混合物的方法。??? 离子对：两个相反电荷的离子相互作用形成一个中 性化合物。 原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相（固定相）中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配。 由于待测离子的性质不同，与对离子形成离子对的能力不同，形成的离子对的疏水能力不同，在两相间的分配系数不同，从而实现色谱分离。 阴离子分离：烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子。 阳离子分离：烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子。 五、空间排阻色谱---凝胶色谱 原理：利用凝胶中孔径大小的不同，按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。 快速分离不同分子量混合物的色谱方法。 相对分子质量差别 大于10％的化合物 才可以分离 排阻色谱分离示意图 六、亲和色谱 原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特性亲和力，进行选择性分离的一种色谱方法。 具有反应活性的连接链（环氧、联胺等） 酶、 抗原等 一、固定相 二、流动相 一、固定相 固定相 分配色谱固定相 液-固吸附色谱固定相 离子交换色谱固定相 空间排阻色谱固定相 手性固定相 （一）、分配色谱固定相 分类 全多孔型固定相 表面多孔型固定相 化学键合固定相 多孔球体(氧化铝、硅藻土等) +固定液 微珠担体(玻璃微球) +固定液 硅胶表面键合有机分子 早期固定相 已不多见 利用硅胶表面存在的硅羟基，通过化学反应将有机分子键合到硅胶表面。 化学键合固定相 A. 硅氧碳键型： ≡Si—O—C B. 硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C C. 硅碳键型： ≡Si—C D. 硅氮键型： ≡Si—N ODS(C18)键合相 硅胶 十八烷基氯硅烷 双重分离机制： (键合基团的覆盖率决定分离机理) 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主。 （二）、手性固定相 将手性冠醚或环糊精键合到二氧化硅上。用来拆分生