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2011-12-29 承担单位：福建省农科院果树研究所 试验设计：影响莲雾生长发育因素研究 试验项目：莲雾叶片对低温胁迫的反应 试验人员：魏秀清 试验负责：许家辉 设计日期：2011-12-29 计数月份：2011年12月 研究资格系数 (0.5-1.0) 实验设计系数 （0.9-1.0） 报告得分 总分 实验设计 实验记载 实验分析 实验简报 实验文章 1-20% 21-40% 41-60% 61-80% 81-100% 1%-5% 设计，实施实验，记载，分析清晰，结论清晰文献完整，发表水平 福建省农业科学院果树研究所 龙眼枇杷育种工程技术研究中心 电话: 0591 传真: 0591试验目的试验方法2.1 样品 为厦门亚热带植物研究所利用成熟枝扦插培育的农科一号、农科二号莲雾的生长后3个月的盆栽小苗，生长状况良好，采用每月每盆施用复合肥5g，保持土壤湿润等常规管理。 2.2 LT50的测定 将工业酒精置于密闭的容器中于低温冰箱(-40℃)中过夜，以此得到较低温度的酒精。将其与室温的酒精按不同比例在保温筒内混合，得到0、-2、-4、-6、-8、-10、-12、-14℃等8个温度梯度。莲雾成熟叶片（叶龄90d）于自来水下冲洗后，用去离子水冲洗，晾干后，在叶片相似部位避开叶脉打20个圆片，放进20ml带塞试管，将试管置于以上混合酒精里，处理1h后取出，4℃下解冻30min，化冻后每试管加入4ml双蒸水，抽真空15 min后于20～30℃保温振荡4 h，测前充分摇匀自由水束缚水 用0.5c m 打孔器在叶片上对称打取圆片(避开大叶脉)，每瓶装入50片，盖紧，分别精确称重。将其中3只称量瓶放入烘箱中，于105℃下杀青15min，然后转入75℃下烘干至恒重，计算叶片的鲜重含水量。取质量分数为60％蔗糖溶液5mL分装于另外3只称量瓶，加盖，精确称重，算出糖液重，然后置于暗处，并经常摇动。待平衡后用阿贝折射仪测定蔗糖溶液于浸泡组织前后的浓度。按下式计算烟叶自由水与束缚水含量： 自由水含量＝S（Cl－C2） / C2（W2－W1） 鲜重含水量=（W2－W3）/（W2－W1） 束缚水含量：鲜重含水量－自由水含量 式中：S蔗糖溶液质量( g ) C1 蔗糖原液质量分数(％) C2 浸泡后糖液质量分数(％) W1称量瓶质量( g ) W2瓶质量 + 鲜样质量( g ) W3瓶质量 + 干样质量( g ) 2.4.3可溶性糖含量 蒽酮比色法：分别配制浓度为0、20、40、60、80、100μg/ml 的葡萄糖溶液，并取1ml分别置于6只大试管中，各加5ml蒽酮试剂（称取1g蒽酮溶于1000ml 98%的浓硫酸中），并快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10min，取出冷却，在620nm 波长下，用紫外分光光度计测定吸光值，并以吸光值为纵坐标，葡萄糖含量（μg）为横坐标绘制标准曲线。称取各根部样品0.05g，放入大试管中，加入15ml 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20min，取出冷却，过滤入100ml 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。取待测样品提取液1ml 于试管，并加蒽酮试剂5ml，同以上操作沸水浴中显色并测定吸光值。重复3次。可溶性糖含量（%）=（C×VT×100）/（W×V1×106） 式中：C：从标准曲线查得的葡萄糖含量； VT：样品提取液总体积； W：样品重量； V1：显色时取样品液量。 2.4.4 相关酶活性及丙二醛含量测定 酶液提取：称取样品1.0g，加入8 mL 50 mmol/L pH 7.0 PBS，冰浴研磨，于15000g低温离心20min，取上清液供POD，PPO，SOD，CAT活性和MDA含量测定用。（要测定组织蛋白含量） POD活性：按照POD测定试剂盒说明进行。 SOD活性：按照测定试剂盒说明进行 CAT活性：按照测定试剂盒说明进行按照测定试剂盒说明进行试验结果试验