一概述二致病菌的初筛及鉴定系统.PPT

食品中致病菌的初筛鉴定和污染源的追溯 ------ 分子生物学技术在食品 检验中的应用 大纲 一.概述 二.致病菌的初筛及鉴定系统 (一).目前食品安检中致病菌常规的检测方法 (二).常规检测方法的优缺点 (三).食品微生物检测的发展趋势 (四).分子生物学理论基础 (五).分子生物学检测技术---PCR技术和Real-Time PCR技术详解 (六).分子生物学检测技术---生物芯片技术（探针技术）简介 (七).分子生物学检测技术的优缺点 (八).分子生物学鉴定技术简介 三.致病菌污染源的追溯系统 (一).概述 (二).目前常用的污染源追溯方法---PFGE电泳方法简介 (三).DuPont公司RiboPrinter? System简介 一.概述 微生物检测 一.概述 食品中致病微生物的检测 二.初筛及鉴定 常规检测步骤： 二.初筛及鉴定 1.生物梅里埃选择性培养基平板法 （1）.chromID? 阪崎肠杆菌显色平板 2种显色底物用来显示2种阪崎肠杆菌的特异性酶活性：α-D-吡喃葡萄糖苷酶glucopyranosidase and β-D-纤维二糖酶,并可以检测低活性的α-D吡喃葡萄糖苷酶菌株。抗生素用来抑制大多数革兰氏阳性菌、酵母菌和一些革兰氏阴性菌的生长 24小时培养后获得典型的菌落（蓝灰色到蓝黑色），48小时培养后出现特有的菌落形态。因此可以在48小时一次判读结果。 35-37°C和 41.5°C培养均通过评估，通过评估可在mLST＋新生霉素或EE肉汤增菌培养后使用 (FDA/CFSAN:2002) （2）. chromID 沙门菌显色平板 特异性: 3种显色底物能更好地选择性分离和区分 包括伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌和绝大多数乳糖阳性地沙门氏菌在内的沙门氏菌。 营养成份: 在强选择性成分作用下，沙门氏菌经过 37° C 18-24小时培养形成较大、边缘不规则、显色明显的菌落。 选择性: 强选择性确保抑制污染食物的其它菌落如：革兰阳性球菌、酵母菌和大部分非发酵革兰阴性细菌。 二.初筛及鉴定 2.生物梅里埃免疫检测法---VIDAS系统 VIDAS 金葡菌肠毒素 葡菌肠毒素是引起食物中毒的常见原因。 7种不同的血清型可被鉴定。这些毒素蛋白最初仅由金黄色 葡萄球菌产生，但目前有报道中间型葡萄球菌和猪葡萄球菌也能产生毒素。尽管葡萄球菌可通过加热 破坏，但这些毒素是热稳定性的，可在高温下存活。 生物梅里埃采用尖端科技的ELFA技术，运用能更好的捕获抗原的新抗体 工作。移去粘附在酶结合抗体上的Fc片断，明显增强了试剂盒的性能。 移去Fc片断减少了可能产生潜在错误信号干扰的食物成份和非特异性结 合的其它细菌，提高了特异性。释放2个小的Fab’片断优化了抗体的位置， 更好地结合抗原，提高了敏感性.VIDAS SET2是一个由包含成品试剂和SPR （固项容器）管组成的单剂量试剂。 VIDAS全自动仪器进行整个检测步骤并打印结果：阳性或阴性 检测食品中的葡萄球菌毒素 检测时间: 80 分钟 整个检测周期: 少于1天 二.初筛及鉴定 1.常规检测方法的优点 (1).直观 由于常规检测方法是用微生物的培养法来进行的，所以此类方法很直观，经过一定时间的培养后，进行菌落形态和细菌形态及细菌生理生化的鉴定，有没有一目了然，非常直观。 (2).经济 由于常规方法不需要特殊的试剂，显色培养基和普通染色镜检即可完成检验和鉴定，所以成本低廉。 2.常规检测方法的缺点 (1).周期长 由于常规检测用的是微生物的培养法，需要不断的选择性培养纯化，再加上生理生化的鉴定，周期非常长（一周左右）。 (2).不能准确鉴定变种致病菌 打个比方，常规的鉴定方法就像鉴定一个人一样，先看人群的形态（物以类聚，人以群分，类似于菌落形态），再看此人穿什么样的衣服（类似于有无鞭毛和荚膜），接下来看此人的外貌（有无特殊的标志，类似于细菌的形态学观察），最后看此人的习惯（类似于细菌的生理生化特点，遇染色培养基变色等）。但是细菌的变异率是非常高的，遇见变异的致病菌和未知的致病菌，我们往往会束手无策，常常会得出是是而非的结论。 二.初筛及鉴定 1.准确 这是任何一种检测方法的基本要求，其他有点要在此基础上建立。对于变异的致病菌和未知的细菌 也要能准确无误的做出鉴定。 2.快速灵敏高效，操作简便 在准确的基础上，能够快速得出检测的结果，以减轻仓储和物流的压力，达到快