实验一、普通光学显微镜的结构和使用.PPT

马蛔虫受精卵：找到分裂中期的细胞，染色体被染成蓝色条状、棒状，位于细胞中央，在染色体两侧各有一个较小的蓝色颗粒，即为中心体，在中心体的周围可见呈放射状的星丝。 * 今天的实验包括两个内容：一个是常用的显示细胞内化学成分的方法，另一个是我们培养细胞时计算细胞浓度的最基本方法——细胞计数。 * 这是我们做这个实验的目的和要求：1、~；2、~；3、~。 * 细胞内的化学成分种类很多，各种生物大分子，如蛋白质、核酸等，由于组成成分和分子结构不同，因而具有不同的化学性质。根据这些生物大分子的不同化学性质和特点，人们设计了许多特异性的化学反应来显示细胞中的蛋白质、酶和核酸。 核酸是细胞中一类重要的生物大分子，按其化学组成，可分为DNA和RNA两类。核酸呈酸性，重要化学性质之一是可与碱性染料反应而显色，使其在细胞中原位显示出来。DNA和RNA分子聚合程度不同，所以分别对不同的碱性染料具有亲和力，因而科显示出两类核酸分子在细胞中的分布。甲基绿和哌洛宁是用于区分DNA和RNA的两种碱性染料；甲基绿分子对聚合程度高的DNA有强的亲和力，可将DNA染成蓝绿色；而哌洛宁分子仅和聚合成都低的RNA相结合，将RNA染成红色。 * 这是两块细胞计数板，其中一块暗的用于未染色的细胞计数可看的清楚些，血细胞和染色细胞我们都常用这种透明的血细胞计数板。一块计数板有两个计数室在中间的位置，两边有高出的棱当盖上盖玻片后，盖玻片与底面之间有一0.1mm的缝隙，把细胞悬液滴入缝隙就可以计数了。血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，为两个计数室，每个计数室上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大方格。 * 细胞计数时，需要用到一个器材——血细胞计数板（见下页照片） 。然后需先将培养细胞或血细胞稀释成细胞悬液滴入细胞计数板上的计数室中。血细胞计数板有两个计数室，每个计数室分为9个大方格，每个大方格的边长为1mm，计数室的底与盖玻片间的距离为0.1mm，即每大格的容积为1mm×1 mm×0.1mm=0.1mm3。四角的每个大格被分为16个中格。计数时只需计算4个角的4个大方格的细胞数即可。 * 制片时，取一只蛙用刺针破坏脊髓将其处死，剪开开腹腔、暴露心脏；取血一小滴，滴于洁净的载玻片一端，另用一张边缘平整的载玻片，抵住拨片一端成45°角向前推移，使血滴成薄薄一层，即成血涂片。 试室温晾干后，置70%乙醇中固定，时间5min即可。晾干后滴加甲基绿-哌洛宁染液染色5-10min，然后用水冲洗掉染液，冲洗时将水龙头谁放成一条细线，不要大水冲洗，避免冲掉细胞涂层。冲洗后在纯丙酮中沾一下，时间不需过长，目的是去掉细胞中未染色的部分。 最后置显微镜下观察，可见细胞核染成蓝色，说明DNA主要分布在细胞核中；胞质染成红色，说明RNA主要分布于细胞质中，核中也可见少许红色，那是核仁的位置。 制备蟾蜍血细胞悬液（1份蟾蜍血+10份0.17mol/L氯化钠溶液）制备好血细胞悬液后，备用。务必使细胞分散成单个细胞，取样计数前，应充分混匀细胞悬液。 现将血细胞计数板放在显微镜载物台上，用10×物镜观察，注意将光圈调至最小，方能清晰看到计数室的格子。 * ?加样时，吸取细胞悬液少许，滴加在盖片边缘，悬液会自然流入计数室内，充满盖片和计数板之间，注意加样时不可将玄烨滴在盖玻片之上，或盖片下不要有气泡，否则将影响技术结果，需要重做 。 计数时，对于分布在刻线上的红细胞，依照“数上不数下，数左不数右“的原则进行计数。计数时，如发现各中方格的红细胞数目相差20个以上，表示血细胞分布不均匀，必须重新计数。 * 为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如细胞位于方格的边线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。 见下图：即本格中计数细胞为3个。 测数完毕，取下盖玻片，用水将细胞计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吸水纸擦干，放入盒内保存。 * 完成实验报告，写出结果：1、将血涂片染色后的观察绘图下来，并标明DNA、RNA在细胞中的位置。 * 2、最后将在计数室观测到的细胞数代入公式，算出细胞浓度。单位是 ：个/ml。 * 实验四 细胞的有丝分裂和减数分裂 【实验目的】 掌握细胞有丝分裂的过程和各时期特征； 熟悉植物细胞染色体压片标本的制作方法； 了解生殖细胞减数分裂过程和特征。 【实验原理】 体细胞有丝分裂 【实验步骤】 A 大蒜根尖有丝分裂压片的制备和观察 1 大蒜根尖用0.5%秋水仙素处理2－4h 2 洗去Col后，切下根尖置于小瓶中，