实验八.细胞化学.pptVIP

实验三核酸(DNA和RNA)的细胞核定位观察 p220 作业： 实验原理 Unna染色法 主要成分：甲基绿-派洛宁混合染料（碱性染料） 原理：核酸是酸性的，它们对于碱性染料具有亲和力，但是DNA和 RNA对甲基绿-派洛宁混合染料的亲和力不同，而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。DNA被甲基绿染成绿色，RNA被派洛宁染成红色，这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来 Unna染色法实验步骤 撕取洋葱内表皮 ↓ 小离心管Carnoy固定剂 15 min ↓ 95%酒精复水5 min ↓ 70%酒精复水5 min ↓ H2O 5min ↙ ↘小离心管 表面皿中实验组 对照组→ 5% 三氯乙酸（TCA） ↙ 90℃保温,15min H2O 5min ↙ Unna 染液 20min(室温) ↓ H2O漂洗几秒后 丙酮 分色6-10Sec ↓ H2O洗片刻 ↓ 水压片分别镜检观察 背景知识 核酸是一种线形多聚核苷酸，它的基本单位是核苷酸。细胞核内存在有两种核酸：DNA和RNA，它们具有类似的化学组成，即均由含氮碱基，戊糖和磷酸组成，可表示如下: 磷酸 核糖（RNA） 核酸 核苷酸 戊糖 脱氧核糖（DNA） 核苷 A、G、C、U (RNA) 碱基（嘌呤/嘧啶） A、G、C、T（DNA） DNA是染色体的主要成分，在细胞核内呈双螺旋结构。 RNA是单链线形，主要有三种类型: 核糖体RNA (rRNA) 转运RNA（tRNA) 信使RNA（mRNA) ? rRNA含量大，占细胞RNA总量的80％左右，是核糖体的重要组成部分，而rRNA的合成、加工和核糖体亚单位的装配都是在核仁中进行的。 ?tRNA约占全部RNA的15％，它在蛋白质生物合成过程中具有转运氨基酸的作用。 ?mRNA的含量最少，只占5％左右，它是以DNA为模板合成的，它又是蛋白质合成的模板。 rRNA基因的转录? 快速生长的哺乳动物细胞中(培养的Hela细胞), 转录生成的RNA总量的80%-rRNA; 15%-tRNA; 编码蛋白质的mRNA量少 ? 处于生长中的高等真核细胞一般需107核糖体以确保蛋白质的合成, so真核细