实验一尿蛋白的测定(双缩脲法).docVIP

实验一 尿蛋白的测定（双缩脲法） 尿蛋白是指尿中蛋白质而言，尿蛋白的主要成分是白蛋白。正常人尿内含有微量蛋白质，成年人每天约排出50-100mg，偶尔达150mg。在体育运动或训练后，尿中蛋白质的排出量可能达到250mg以上，白天任意尿所含蛋白质可少于10mg/100ml，夜间混合尿可达20mg/100ml。 由于运动而出现尿中蛋白质增加的现象称为运动性蛋白尿。研究证明，运动后尿蛋白数量的多少与运动量尤其运动强度有关；与运动员身体机能状态有关；与运动员的情绪有关；与不同体育项目有关……。因此，测定运动员运动后尿中蛋白质的含量，可作为一个简易的生化指标来评定运动员的身体机能状态、运动强度和运动量等。 一、实验目的 1、学会使用移液管，掌握双缩脲法测定尿蛋白的原理和操作方法。 2、初步掌握分光光度计的使用，了解比色法的基本原理。 二、实验原理 蛋白质是含氮的有机高分子化合物，分子中含有多个与双缩脲分子相似的结构（肽键），碱性硫酸铜溶液中，蛋白质与硫酸铜的Cu2+离子等络合物生成紫色络合物。经光电比色可求出尿中蛋白质的含量。反应如下： 三、实验试剂及仪器 1、实验试剂 1）、0.15N硫酸 2）、0.15%钨酸钠溶液 3）、双缩脲试剂：称取硫酸铜(CuSO4?5H2O,A?R或CP)1.5克、酒石酸钾钠或（NaKC4H2O,4H2O6 A?R或CP）6克，分别用蒸馏水约250ml溶解后，全部转移入1升容量瓶中，混合。再加入10%氢氧化钠溶液约300ml，随加随摇匀。最后用蒸馏水稀释至1升。保存于塑料试剂瓶中或内壁涂有一层纯净石蜡的普通试剂瓶中。如无红色或和黑色沉淀出现，此试剂可长期使用。 4）、0.9%生理盐水 5）、标准蛋白溶液（500mg/100ml） 2、实验仪器 分光光度计、离心机、移液管、离心管、洗耳球 四、实验操作步骤 测定管（离心管） 5ml尿液 b1 0.15N硫酸2.5ml b2 1.5%钨酸钠2.5ml b3 混匀后离心5分钟(3000转/分) 倾去上清液,加生理盐水1ml,搅拌 b4 加双缩脲试剂4ml b5 混合后放置20-30分钟 540nm比色,空白调零读取测定管光密度值(OD测) 五、计算尿蛋白含量 计算公式：尿蛋白（mg%）=（ OD测/OD标）χ50 其中测得OD标为0.131 六、注意事项 1、如果尿液比较混浊，可能是尿液中的无机盐含量过高造成，会影响测定结果，可通过加热消除。 2、在用玻棒搅拌助溶时，注意不或垂直用力，否则容易造成离心管底破裂而终止实验。 双缩脲试剂 双缩脲 双缩脲-铜-钾-络合物（紫色）