マイクロアレイの临床应用.ppt

マイクロアレイの臨床応用 東京大学大学院医学系研究科 健康科学?看護学専攻生物統計学 伊藤 陽一 がん臨床研究におけるマイクロアレイの利用 臨床検体(がん細胞)特有の問題 遺伝子発現測定のバラツキ 遺伝子発現パターンによるがんの診断と予後予測(Ramaswamy, S. and Golub, T.R. 2002) がん細胞検体の問題 どの細胞を用いるのか(本質的に異質性が高い) 特定の状態のがん細胞を用いる がん細胞全体を用いる 対照細胞を何にするのか(二蛍光標識法の場合) 対象者の正常細胞 (Laser Capture Microdissection) 培養した細胞株(正常細胞 or がん細胞) 遺伝子発現測定のバラツキ 遺伝子発現測定のバラツキの原因 検体における細胞組成のバラツキ 検体の前処理段階におけるバラツキ 非特異的クロスハイブリダイゼーション アレイ間のバラツキ 実験計画の段階からバラツキを減らす工夫が重要(Lee, M.T. et.al. 2000)(Kerr, M.K. and Churchill, G.A. 2001) 遺伝子発現パターンによるがんの診断と予後予測 疾患分類研究 急性白血病分類(Golub, T.R. et.al. 1999) (Armstrong, S.A. et.al. 2002) 予後予測研究 びまん性大細胞型Bリンパ腫 (DLBCL)(Alizadeh, A.A. et.al. 2000)(Rosenwald, A. et.al. 2002) 白血病とは 造血系細胞が骨髄の中で腫瘍化すなわち白血病化した疾患 骨髄が白血病細胞により占拠され、正常造血機能が抑制 赤血球減少による貧血、白血球特に好中球減少による感染症、血小板減少による出血傾向 白血病の病型分類 急性骨髄性白血病 (acute myeloid leukemia; AML)FAB分類：M0, M1, M2, M3, M4, M5, M6, M7 急性リンパ性白血病 (acute lymphoblastic leukemia; ALL) FAB分類：L1, L2, L3 慢性骨髄性白血病 (chronic myeloid leukemia; CML) 慢性リンパ性白血病群 慢性リンパ性白血病 (chronic lymphocytic leukemia; CLL) 前リンパ球性白血病 (prelymphocytic leukemia; PLL) 毛様細胞白血病 (hairly cell leukemia; HCL) 大顆粒リンパ球性白血病 (large granular lymphoblastic leukemia; LGLL) 慢性骨髄増殖性疾患群 (myeloproliferative disorders; MPD) 真性赤血球増加症 (polycythemia vera; PV) 本態性血小板血症 (essential thrombocythemia; ET) 慢性好中球性白血病 (chronic neutrophilic leukemia; CNL) 骨髄線維症 (myelofibrosis) 成人T細胞白血病?リンパ腫 (adult T-cell leukemia/lymphoma; ATLL) 急性白血病の鑑別診断 組織化学染色 ペルオキシダーゼ染色(陽性：骨髄性、陰性：リンパ性) エステラーゼ染色 細胞表面形質と細胞質内形質 モノクロナール抗体 染色体と遺伝子異常 急性白血病の鑑別診断法 疾患分類研究 AMLとALLの分類(Golub. et.al. 1999) 38検体(11 AML, 27 ALL) 検証用34検体(14 AML, 20 ALL) 6817遺伝子 MLLとAML,ALLの分類(Armstrong. et.al. 2002) 56検体(20 ALL, 17 MLL, 20 AML) 12600遺伝子 Neighborhood Analysis Neighborhood Analysis 上位50遺伝子の遺伝子発現 疾患分類研究 AMLとALLの分類(Golub. et.al. 1999) 38検体(11 AML, 27 ALL) 検証用34検体(14 AML, 20 ALL) 6817遺伝子 MLLとAML,ALLの分類(Armstrong. et.al. 2002) 56検体(20 ALL, 17 MLL, 20 AML) 12600遺伝子 MLLとALL,AMLの分類 主成分分析 疾患分類研究の問題点 既存の検査で分類可能な疾患を遺伝発現パターンで分類する必要性はあるのか ｃDNAアレイを用いた場合の対照細胞は適切かどうか 生物学的に解釈可能なのか 結果の再