实验一 组织制片技术（一） 【实验原理】 显微鉴定法就是利用显微镜、显 .doc

实验一 组织制片技术显微鉴定法就是利用显微镜、显微技术及显微化学方法等对中药进行分析鉴定以确定真伪、纯度、品质以及鉴别。多数用于品种鉴定，部分用于定量分析。在鉴定过程中，以采用显微镜观察动、植物的组织构造、细胞形状、内含物的特征以及矿物的光学特性等为主要内容。按照鉴定的方法可分为组织鉴定、粉末鉴定、显微常数测定和显微定量等。组织鉴定是粉末鉴定的基础，以粉末鉴定应用最为广泛。 显微鉴定是一项专门技术，需要有植物(动物)解剖学、矿物学的晶体光学、植物显微化学等基本知识，掌握显微制片等基本技术。显微鉴定的主要仪器有各类光学显微镜和电子显微镜等，通常使用光学显微镜。 2.试剂 水合氯醛试剂，苏丹Ⅲ试液，稀甘油试剂，盐酸，硝酸，碘化铋钾试剂，氯化锌碘试液，硫酸，α-萘酚浓硫酸试液，碘试液，间苯三酚试液，钌红试液，硝酸汞试液，乙醚，石油醚，90%乙醇，70%乙醇，α-萘酚乙醇溶液，稀盐酸，稀醋酸等。 3.药材样品：牛膝、薄荷 4.药材粉末：大黄、肉桂、山药 【实验内容】 一、显微鉴定 1.组织鉴定 组织鉴定是通过观察药的组织构造特征来达到鉴定目的，主要用于个体较小的完整药材鉴别。通常用以鉴别药材性状特征不明显或外形相似而组织构造不同的类似品、混淆品、代用品、伪品，或用于多来源药材的对比鉴别，也可用于确定某种化学成分的存在部位，以考查质量。一般地说，组织鉴定对不同科属来源的药材鉴别比较容易，对于相同科属的药材鉴别比较困难。 粉末鉴定 主要是通过观察中药的细胞、内含物和颗粒物质的性状特征来达到鉴定的目的。通常用于粉末药材、外形较大或组织构造无鉴别特征的药材、破碎药材、粉末性的中成药。 显微常数测定 常见的显微常数主要有用于植物的叶类中药鉴别的栅表细胞比、气孔数、气孔指数、脉岛数和脉端数等，这些显微数据常因中药原植物种类不同而异，常用于叶类药材、部分花类和带叶的全草类药材的定性鉴别。尤其是一些同属不同种来源的药材，当其他显微特征如毛茸、结晶等比较相似而难以鉴别时，这些显微数据的测定对于品种鉴定具有重要的意义。 显微化学鉴定 在进行显微鉴定工作中，经常用显微化学反应来检查中药细胞壁和细胞内含物化学物质的性质来达到鉴定的目的。当药材的数量很少、其中的某些成分化学反应较灵敏时，可使用显微化学鉴定法。显微标本片的制备 在进行显微鉴定时，应首先选择具有代表性的检品，制作显微标本片，然后在显微镜下进行观察。显微标本片根据制作方法和保存的需要，分为半永久制片、永久制片和临时制片3大类。半永久制片的封藏介质是半固体，可作暂时性保存；永久制片的封藏介质是固体，可作长期保存，但其制作费时，多用于特殊目的，如供显微摄影和核对标本等应用；临时制片的封藏介质是流动性液体，容易损坏，不耐久藏，但制作简单、迅速，适用于一般观察及进行显微化学反应，在中药鉴定工作中应用最多。在鉴定工作中，由于观察的目的不同，对不同检品采取的制片方法也不同，所以又分切片标本片(包括横切片、纵切片纵切片又包括切向纵切片和径向纵切片)、解离组织标本片、表面标本片、粉末标本片和磨片等。其中横切片多用于观察组织的排列特征；纵切片多用于观察茎、木类中药的某些细胞组织，如射线的特征；解离组织片用于观察某些细胞的形状，如纤维、石细胞等；表面片多用于观察叶、花、全草、果实和种子等的表面特征，一般取某一部分制片；粉末片多用于观察组织碎片、细胞及后含物或某些中药颗粒的特征；磨片用于坚硬药材如骨类、贝壳类及矿石的显微特征观察。 的方法镜时视野的寻找应先用低倍镜再适当的高倍镜察。即按“先低倍后高倍”的原则进为了避免在显微观察时，对本片内某些少见或偶的特征遗漏而影响观察结果。我可采用“之”字移动法，使标本片沿着一定的线路移动，这样可以检查玻片下的各个部位。 此法是在对焦后，旋动移动器，从盖玻片的左角开始，逐渐使视野由左向右移动，到达右端后，使视野向近侧移动2／3～3／4个视野，然后使视野由向移动，到达左端后，再如前法移动，直到整个标本片全部观察完毕。镜检时视野移动线路如图。 图镜检时视野移动线路 在进行一般的鉴定作中，为防止粉末混合不均匀的因素，需观察13张标本片为宜，以消除取样引起的差异。 鉴别特征的重复观察在观察微本(尤其是粉或解离组织片时)往往需要新观察某个显微特征颗粒，为此有必要对特征在片的位进行记录以便再次观察时能够迅速重现。记录的方法有两 （1）坐标法把需要重现的特移野的中记录标本动器横坐，纵的置即可。在重复观察时，只要放上该标本片并把 （2）标记法纸即剪一小片白，盖片，在纸上用小圆圈标记出盖玻片下的物现的相然在载玻片的，以供参。盖玻片标记法即在盖玻片的物的。应当注意的是，论采用哪种记录方法，盖玻片都不可移动。否则记录的数据或可能失效显微特征的描述 中药的