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方法学验证的相关内容学习[日期：2008-09-17]来源：中国药品生物制品检定所? 作者：wangchen[字体： HYPERLINK javascript:ContentSize(16) 大 HYPERLINK javascript:ContentSize(14) 中 HYPERLINK javascript:ContentSize(12) 小] 本文由wangchen根据药物所张金兰教授的授业内容整理而成内容提要：（方法学验证的应用、依据、类型、一般参数、要求）验证应用：方法验证是对测定方法的评价，是建立新方法的研究内容和依据。（新建方法、已建立方法的修订验证、已建方法的复现）验证依据：方法应用领域对方法验证要求的“指导原则”验证类型：全部验证Fall validation、部分验证Partial validation、交叉验证cross validationl???????? Full validation：第一次新建方法；一个已建方法，但增加分析对象（精密、回收）。l???????? Partial validation：（已建方法的部分改变）1)??????? 分析方法改变（检测器改变）；2)??????? 生物样品（抗凝剂改变）；3)??????? 基质改变（血－尿）；4)??????? 前处理方法改变；5)??????? 生物样品种属改变（rat大鼠－mouse小鼠）；6)??????? 仪器改变工作软件改变；7)??????? 稀有生物样品，取样量有限。l???????? Cross validation：样品分析在不同场所或实验室进行时，不同实验室需进行加样生物样品或实际样品分析，建立实验室间的重现性数据。当分析数据由不同检测技术产生时 LC－MS vs ELSD 需交叉验证 部分验证：准确度，精密度（都做） 交叉验证：加样准确度，实际样品分析（任一）一般参数：精密度precision:同一匀质样品的一组测量值，彼此符合的程度。1)????? SD 标准偏差 standard deviation2)????? ％RSD 相对标准偏差relative SD， CV 变异系数 n8标准差 SD=开方（求和（xi－x均值）/（n－1））％RSD＝SD/x均值×100％l???????? 日内精密度（intraday precision）：同一次测定，7～10份，按方法做。测定，SD值，RSD限度（生物制品5％，药品2％）。l???????? 日间精密度（interday precision）：不同一次测定，7～10份，按方法做。测定，SD值，RSD限度（生物制品15％，药品5％）。准确性accuracy：l???????? 结果与真值的接近程度，表示分析方法测定的正确性，通常用回收率实验表示（加样回收率）。l???????? 回收率＝（测定液测定值－原样液含测值）/加入量值×100％灵敏度：l???????? 检测限（limit of detection LOD）：分析方法能从背景信号中区分出药物，所需样品中药物的最低浓度，LOD反映方法与仪器的灵敏度和噪音也表明样品经处理后本底值的高低。S/N3l???????? 定量限（limit of quantitation LOQ）在保证具有一定可靠性（一定准确度和精密度）分析方法能够测定出样品中药物的最低浓度。反映分析方法测定含药物的低浓度样品时的可靠性。选择性（selectivity）：分析方法从其他成分中区分并定量目标成分的能力l???????? 专属性（specificity）：指一种方法仅对一种分析成分产生唯一信号l???????? 选择性（selectivity）：指一种方法可对多种成分产生不同响应，主要成分响应可与其他成分区分选择性的区分选择内容：n???????? 化药：杂质、降解产物、相关化合物、制剂辅料（可通过空白比较和添加法所得分析结果比较确定）n???????? 体内药物：内源性物质、代谢物、分解产物、分析中的相伴物、内源性代谢物n???????? 体内药分的选择性内容：空白生物样品（血尿、胆汁等）、至少六个来源的生物样品（非MS方法）、每个空白样品均测定干扰和LOQ。线性（liner）：l???????? 给定范围内获取与样品中供试物浓度成正比的试验结果的能力l???????? 线性范围是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的试验结果，而且呈线性的供试物浓度的变化范围其最大、最小量间的间隔。l???????? 浓度范围包括5-8个浓度点，标准曲线应覆盖样品浓度范围。1.?????? 药物一般80-120%（但低限不低于LOQ）2.?????? 体内药物、浓度上线高于样品最高浓度，下限为LOQ3.?????? 相关系数(r