色谱分析技术在兽药残留与违禁添加物检测中应用具体实例.ppt

色谱分析技术在兽药残留及违禁添加物检测中的应用具体实例; 国内检测方法的分类： 国家标准方法、地方标准方法、 行业标准方法、企业标准方法 ....... 检测方法标准的基本内容：;1、样品提取2、样品净化3、上机测定4、结果计算;1. 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法—高效液相色谱法;原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法—高效液相色谱法（原文参见GB/T 22388-2008）2008-10-07发布 2008-10-07实施;1.2 样品处理 1.2.1提取 （1）液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等 称取2g（精确至0.01g）试样于50mL具塞塑料离心管中，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超声提取10min，再振荡提取10min后，以不低于4000 r/min离心10min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL滤液，加入5mL水混匀后做待净化液。;1.2.2 净化 阳离子固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，60mg/3mL ，或性能相当者。使用前依次用3mL甲醇、5mL水活化。 将待净化液转移至固相萃取柱中。依次用3mL水和3mL甲醇洗涤，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1mL/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干，残留物用1mL流动相定容，涡旋混合1 min，过微孔滤膜后，供HPLC测定。;a）色谱柱：C8柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5μm，或相当者； C18柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5μm，或相当者。 b) 流动相：C8柱，离子对试剂缓冲液-乙腈（85+15，体积比），混匀。 C18柱，离子对试剂缓冲液-乙腈（90+10，体积比），混匀。 c) 流速：1.0 mL/min。 d) 柱温：40℃。 e) 波长：240 nm。 f) 进样量：20 μL。;1.4 标准曲线的绘制 用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8、2、20、40、80μg/mL的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。 1.5 定量测定 待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。;1.7 空白实验 除不称取样品外，均按上述测定条件和步聚进行。 1.8 回收率及方法定量限 在添加浓度2mg/kg~10 mg/kg浓度范围内，回收率在80%~110%之间， 相对标准偏差小于10%。本方法的定量限为2mg/kg。 1.9 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 ;2. 可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定 —液相色谱紫外检测法（原文参见GB/T20764-2006）;1.2 样品处理 1.2.1提取 称取6 g试样，精确到0.01g，置于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入30mL 0.1 mol／L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(pH＝4)，于液体混匀器上快速混合1 min，再用振荡器振荡 10min，以10 000r／min离心10 min，上清液倒人另一离心管中，残渣中再加入20mL缓冲溶液，重复提取一次，合并上清液。;1.2.2净化 Oasis HLB固相萃取柱或相当者：500mg，6mL。使用前分别用5ml甲醇和10ml水预处理，保持柱体湿润。 阳离子交换柱：羧酸型，500mg，3mL。使用前用5ml乙酸乙酯预处理，保持柱体湿润。 将上清液倒入下接Oasis HLB固相萃取柱的贮液器中，上清液以≤3mL／min的流速通过固相萃取柱，待上清液完全流出后，用5mL甲醇 + 水（1+19）洗柱，弃去全部流出液。在65kPa的负压下，减压抽干40min，最后用15 mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液于100mL平底烧瓶中。 将上述洗脱液在减压情况下以≤3mL／min的流速通过羧酸型阳离子交换柱，待洗脱液全部流出后，用5mL甲醇洗柱，弃去全部流出液。在65 kPa负压下，减压抽干5min，再用4mL流动相洗脱，收集洗脱液于5mL样品管中，定容至4mL，供液相色谱-紫外检测器测定。 ;1.3 高效液相色谱测定 液相色谱条件 a) 色谱柱；Mightsil RP-18 GP，3μm，150mm×4.6 mm或相当者； b) 流动相：乙腈+甲醇+0.01 mol／L草酸溶液(2+1+7)； c) 流速：0.5 mL／min； d) 柱