2014年高考生物一轮复习课件：选修1 生物技术实践.ppt

[关键一点]　 (1)用凝胶色谱法分离和纯化蛋白质，滴加样品时，吸管管口贴着管壁环绕移动加样，同时注意不要破坏凝胶面。 (2)在蛋白质分离过程中，应仔细观察红色区带在洗脱过程中的移动情况，如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。 (3)血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，可大大简化实验操作。 高考地位 本考点近几年高考中多有涉及，但难度不大 命题角度 多围绕蛋白质分子的分离原理、凝胶色谱法、透析原理及电泳法纯化蛋白质等进行考查，如典例4。 [典例4]　已知某样品中存在甲、 乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，其分 子大小、所带电荷的性质和数量情况如 下图所示，下列有关该样品中蛋白质的分离的叙述正确的是 (　　) A．将样品装入透析袋中透析12 h，若分子乙保留在袋内，则分子丙也保留在袋内 B．若用凝胶色谱柱分离样品中的蛋白质，则分子甲移动速度最快 C．若将样品以2 000 r/min的速度离心10 min，分子戊存在于沉淀中，则分子甲也存在于沉淀中 D．若用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子戊形成的电泳带相距最远 [解析]　分子甲的分子量最小，进入凝胶内部通道而移动速度慢；分子乙留在透析袋内，说明其相对分子质量比较大，分子丙比分子乙相对分子质量大，所以分子丙也留在袋内；分子戊比分子甲的相对分子质量大，故离心后分子甲可能不存在于沉淀物中； SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳中的样品，其电泳迁移率完全取决于分子的大小，相对分子质量相差越大，形成的电泳带相距越远。 [答案] A [高考随堂体验] 1．(2012江苏高考)下列关于“DNA粗提取与鉴定实验”的 叙述，正确的是 A．洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶 解度 B．将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝 C．常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNA的提取 D．用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNA获得量减少 解析：洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质，但不能增大DNA在NaCl溶液中的溶解度；DNA丝状物在二苯胺试剂中沸水浴加热过程中变蓝，不需要冷却；菜花匀浆中含有多种酶，常温下有些酶类可破坏DNA而影响DNA的提取；用玻璃棒缓慢搅拌滤液，有利于提取并防止搅拌时DNA断裂，并不影响DNA的含量。 答案：C 2．(2011·江苏高考)请回答基因工程方面的有关问题： (1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。 图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。 ①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为________ 。 ②在第________ 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。 (2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。 ①第1组：_____________________________________； ②第2组：___________________________________ 。 (3) PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的 功能，这是因为____________ _______________________________________________ 。 解析：(1)①根据PCR过程特点绘制PCR过程示意图如下： 由图可知，以原来的每条母链为模板合成的两个新DNA分子中，只含有引物A或引物B，而以新合成的子链为模板合成新DNA分子时，两种引物都含有，故第四轮循环共产生16个DNA分子，其中含有引物A的分子是15个，占15/16。②由图示知，第一、二轮循环合成的子链长度均不同，根据半保留复制特点，前两轮循环产生的4个DNA分子的两条链均不等长，第三轮循环产生的DNA分子存在等长的两条核苷酸链。 (2)引物是单链DNA时才能与DNA结合，而单链DNA的碱基互补配对部分容易形成双链结构而失去其功能。从图示可以看出，①组引物I和引物II局部碱基互补配对，易形成双链结构而失效。②组引物相互间虽不能发生碱基互补配对，但I′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效。 (3)DNA聚合酶的作用是将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上，而不能直接将两个脱氧核苷酸连在一起。 答案： (1)①15/16 　②三 (2)①引物I和引物Ⅱ局部发