chapter7 液相色谱法.ppt

一、液相色谱简介 二、高效液相色谱法 三、高效液相色谱法 主要分离类型及其选择 四、应用 1.液相色谱理论发展简况 色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也称现代液相色谱。 色谱起源: ☆☆ 纸层析和薄层层析 2. 液相色谱的特点 优点： （1）分离效率高；应用范围宽 （2）分析速度快；样品用量少 （3）灵敏度高；分离和测定一次完成，自动化程度高 （4）适用于高沸点及具有生物活性的物质的分离定性 （5）可用于制备 缺点： （1）有些设备及实验费用高 （2）对某些体系分离效率不高 （3）经典液相色谱分离效率不高，费时等 二、高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography 高效液相色谱法，简称：HPLC. 是利用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，按照固液相之间的分配机理对混合物进行分离测定的色谱方法. 广泛应用于各个领域： 医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业…… 在技术，理论及应用上仍处于发展阶段. 1.HPLC的特点和优点 HPLC有以下特点： 高压：压力可达150～350Kg/cm2； 高速：流速为0.1～10.0mL/min； 高效：可达5000塔板/米，在一根柱中同时分离成份可达100种； 高灵敏度：紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点： 速度快：通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在5min内即可完成； 分辨率高：可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果； 灵敏度高：紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg； 柱子可反复使用：用一根色谱柱可分离不同的化合物； 样品量少，容易回收：样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。 高效液相色谱与经典液相色谱: ■ 高效液相色谱法与气相色谱法 ( 1 ）气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。 ( 2 ) 气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。 （ 3 ）液相色谱可用于制备试样，而气相色谱则不能。 HPLC色谱图（与气相色谱基本相同） 主要部件: 3.高效液相色谱仪的组成 (1)、输液系统 储液瓶、脱气方法[超声、真空和回流脱气]、高压输液系统（高压泵）低压梯度洗脱和高压梯度洗脱 . (2)、进样系统 (3)、色谱柱系统 (4)、检测系统 (5)、馏分收集器（包括记录系统） (6)、柱温箱和控制系统 由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成，其中高压输液泵是核心部件。