gb4789. 35乳酸菌检验.ppt

定义 　　　乳酸菌是指一群通过发酵糖类产生大量乳酸的细菌通称。 乳杆菌属 双歧杆菌属 链球菌属的嗜热链球菌 本标准与GB/T 4789.35-2008相比，主要变化如下： ——修改了乳酸菌总数、乳杆菌、双歧杆菌和嗜热链球菌的计数方法。 本标准的附录A为规范性附录。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： —— GB 4789.35-1996、GB/T 4789.35-2003、GB/T 4789.35-2008。 GB/T 4789.35－2003乳酸菌饮料中乳酸菌检验流程 SN/T 1941.1-2007: 检验方法有三部分： 第1部分：分离与计数方法； 第2部分：PetrifilmTM测试片法； 第3部分：乳杆菌的PCR法 GB/T 4789.35－2008乳酸菌饮料中乳酸菌检验修订 样品制备 7.1.3 固体和半固体食品：以无菌操作称取25 g 样品，置于装有225 mL 生理盐水的无菌均质杯内，于8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，制成1:10 样品匀液；或置于225 mL 生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min 制成1:10 的样品匀液。 7.1.4 液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25 mL 放入装有225 mL 生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成1:10 的样品匀液。 乳酸菌计数 乳酸菌总数 根据待检样品活菌总数的估计，选择2 个～3 个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1 mL 样品匀液分别置于2 个MRS琼脂平板，使用L 形棒进行表面涂布。36℃±1℃，厌氧培养48 h±2 h后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在15min 内完成。 乳酸菌计数 双歧杆菌计数 根据对待检样品双歧杆菌含量的估计，选择2 个～3 个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1 mL样品匀液于莫匹罗星锂盐（Li-Mupirocin）改良MRS 琼脂平板，使用灭菌L 形棒进行表面涂布，每个稀释度作两个平板。36℃±1℃，厌氧培养48 h±2 h 后计数平板上的所有菌落数。 乳酸菌计数 嗜热链球菌计数 根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计，选择2 个～3 个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1 mL样品匀液分别置于2 个MC 琼脂平板，使用L 形棒进行表面涂布。36℃±1℃，需氧培养48 h±2 h后计数。嗜热链球菌在MC 琼脂平板上的菌落特征为：菌落中等偏小，边缘整齐光滑的红色菌落，直径2 mm±1mm，菌落背面为粉红色。 乳酸菌计数 乳杆菌计数 乳酸菌总数结果减去 双歧杆菌与 嗜热链球菌计数结果之和即得乳杆菌计数。 报告（GB/T4789.35-2008） 根据菌落计数结果出具检测报告。最终确定的乳酸菌菌落在30～300之间的平板计数，再乘以相应的稀释倍数，修约保留两位有效数字，之后的数字，采用10的指数表示。参照GB/T 4789.2规定。每克（或毫升）食品中所含有的乳酸菌数以CFU/g（mL）表示。 报告（GB4789.35-2010） 7.3.1 选取菌落数在30 CFU～300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 7.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 7.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 结果的表述 7.4.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）中菌落总数结果。 7.4.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算： 7.4.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 7.4.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 7.4.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。 7.4.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU 之间，其中一部分小于30 CFU 或大于300CFU 时，则以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 菌落数的报告 7.5.1 菌落数小于100 CFU 时