专题2第2节土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

基础知识（14页-记忆内容） (一）培养基 (culture media) 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质叫做 在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成实验室最常用的琼脂固体培养基。 一般的培养基都含有水、碳源、氮源和无机盐。 培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 1000 mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成（15页） （二）无菌技术（15页-了解内容） 1. 对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒（disinferction）。 2. 将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌（sterilization）。 3. 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 4. 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 消毒和灭菌（15页-理解内容） 2．溶化 3. 灭菌 将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压灭菌锅，在压力为100 kPa、温度为121℃条件下，灭菌15—30 min。将培养皿用几层旧报纸抱紧，5—8 套培养基作一包，包好后放入干热灭菌箱内，在160—170 ℃下灭菌2 h。 选择培养基 加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞 加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基: 分离杂交瘤细胞 课题背景 尿素是一种重要的农业氮肥。但是尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶。 尿素最初是从人的尿液中发现的。 1828年，德国化学家维勒成功地通过无机物的化学反映合成了尿素，揭开了历史上人工合成有机物的新篇章。 （三）设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 课题3 分解纤维素的微生物的分离 课题背景 纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。广泛存在于植物的根、茎、叶等器官中。 梯度稀释 按照课题1 的稀释操作方法，将选择培 养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数 到106 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 1、制备培养基:参照旁栏中的比例 2、涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml涂布在培养基上，30℃倒置培养 挑选产生透明圈的菌落 参照课本刚果红染色法，挑选产生透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落 刚果红染色法 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应 方法二：在倒平板时就加入刚果红 思考：这两种方法各有哪些优点与不足 方法一 缺点是操作烦琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发 生混杂；优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 方法二 优点是操作简便，不存在菌落混杂问题 缺点一是由于培养基中还含有淀粉类物质，可以使能产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应；缺点二有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红，形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分 结果分析与评价 （一）培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落 （二）分离的结果是否一致 设置对照，若对照的培养基在培养过程中无菌落生长则说明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落，则说明可能获得了分解纤维素的微生物。 如果不同，分析产生不同结果的原因。 课题延伸 本课题对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选，但是这只是分离纯化的第一步。为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。 练一练： 1、下列关于纤维素酶的说法，错误的是 A、纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种 B、纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖 C、纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁 D、葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖 2、利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是 A、刚果红能与纤维素形成红色复合物 B、刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C、刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物 D、若培养基上产生了透明圈，