仪器分析实验之-高效液相色谱法测定食品中的防腐剂和甜味剂.ppt

高效液相色谱法测定食品中的防腐剂和甜味剂 High performance liquid chromatography 内容提要 高效液相色谱法(HPLC)的特点 高效液相色谱法的主要类型和原理 高效液相色谱仪 色谱柱简介 色谱理论基础 实验内容及注意事项 （二）化学键合相色谱法 以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱法。 化学键合相：采用化学反应的方法将官能团键合在载体表面所形成的固定相。 （三）反相键合相色谱法 固定相：非极性键合相 如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基（C8）键合硅胶 流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极性调整剂 常用甲醇-水、乙腈-水体系等 保留行为的主要影响因素 1、溶质的分子结构（极性） 极性越弱，疏水性越强，容量因子k越大，保留时间tR也越大。 同系物碳数越多，极性越弱，k越大； 引入极性取代基，降低疏水性，k值变小。 2、固定相 键合烷基的疏水性随碳链的延长而增加，溶质的k也增大。 硅胶表面键合烷基的浓度越大，则溶质的k越大。 3、流动相 极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的k越大 溶剂种类：水为弱溶剂，醇为强溶剂 溶剂比例：水的比例增加，使k增大 中性盐的加入：使中性溶质的k增大 pH：影响弱酸、弱减的离解 流动相的pH降低，弱酸k增大，tR增大；弱碱相反。 Agilent HPLC1100五个主要部分: 高压输液/溶剂传输系统 样品进样/引入系统 样品分离系统 信号检测系统 数据处理系统 仪器配置:在线脱气机、四元泵、多波长紫外检测 器、柱温箱、手动进样器、20 mL HPLC进样环。 Agilent HPLC1100堆积配置图 色谱柱填料简介 注意事项： 数据处理之：积分工具栏 防腐剂，苯甲酸和山梨酸及其盐类都是常用食品防腐剂，糖精钠是食品中常用的人工甜味剂。 我国食品卫生标准规定苯甲酸和山梨酸在饮料中最大使用量均为0.2 g/kg。糖精钠最大使用量为0.15 g/ kg。 对以上三种食品添加剂测定的标准方法有：薄层色谱法、气相色谱法及高效液相色谱法， 而高效液相色谱法可以对各种添加剂同时测定，具有高效、高速、高灵敏度及高自动化等特点。 本实验采用高效液相色谱配合多波长紫外检测器，反相色谱法同时测定上述三种食品添加剂，利用保留值定性，外标法定量。 色谱过程动力学 之 塔板理论 塔板高度 H＝L/n 理论塔板数 有效塔板数 tR为样品的保留时间；Wb为峰底宽；tR’为调整保留时间；L色谱柱长度。 1956年范·第姆特（Van Deemter）根据物料平衡导出了： 其中u为流动相线速度，A为涡流扩散项因素，B为纵向扩散项系数，Cm、Cs分别为流动相和固定相传质阻力项系数。 色谱过程动力学 之 速率理论 塔板高度H与线速度u的关系图 吉丁斯（Giddings）等人导出了液相色谱的速率方程如下 ： 涡流扩散项 纵向扩散项 流动相传质阻力项 固定相传质阻力项 停滞流动相的传质阻力项 u: 流动相线速度; l: 填充不规则因子; dp: 固定相的平均粒径; γm: 流动相弯曲因子 (流动相路径弯曲形成的分子扩散障碍) Dm: 溶质在流动相中的扩散系数 (与温度成正比,与分子量的平方根成反比) K’: 容量因子/分配容量; (组分在固定相和流动相中的分配质量之比) e: 固定相的空隙度. r: 固定相颗粒孔道弯曲有关的因子 进样前，必须检测样品pH值，仪器允许范围pH 2~7。 样品必须经过0.45 μm或0.22 μm的滤膜过滤。 最好用流动相溶样。 进HPLC的样品需要严格控制样品的浓度范围，防止系统污染。 严禁长时间以纯水作为流动相 。 流动相缓冲液的pH值，在填料的允许范围（一般为pH 2-8）内。 每次实验结束时，应使反相色谱柱内充满纯有机溶剂。 每次使用缓冲液后，需先使用大量水冲洗，再用纯有机溶剂冲洗。 做样前和做样后要记录柱压，确保要基本一致。 用户图形友好界面 鼠标左键单击任一模块图标均可弹出快捷菜单 使用鼠标左键单击各个模块右下角图标均可对该模块进行控制：开、关或实现基线调零等功能。 所有模块同时开、关控制 积分任务 对当前色 谱图积分 自动积分 积分事件 设置Baseline Now 设置Baseline Hold 设置拖尾 切线撇去 积分器开关 设置斜率 设置最小峰面积 设置固定峰宽 设置肩峰检测 六、 实验内容及注意事项 成人与继续教育学院 成人与继续教育学院 职 职 业 业 教 教 育 育 学 学 院 院 Experimental Center for Chemical education,