仪器分析课件(第十八章色谱法导论).ppt

在其他条件不变的情况下，填料粒度由大变小时，涡流扩散项A变小，纵向扩散项B基本不变，流动相传质阻力项减小，而当固定液含量不变时，粒度变小，表面积增大，液膜厚度变小，固定相传质阻力项减小，即C变小，因此 可知，最小塔板高度减小，而 最佳流速增大 分离度 一、分离度的定义 分离度（resolution，又称为解析度、分辨率）是色谱图中相邻两峰分离程度的量度。两峰间的分离程度受两峰尖的距离和两峰峰宽的制约。 分离度为相邻两峰保留值之差与两峰宽之和的一半的比值。 时，峰间距离等于 ，称为 分离。此时，峰有2%的相互重叠。 时，峰间距离等于 ，称为 分离，峰重叠小于1%，可以认为两峰已经完全分开。 若 值更大，分离效果会更好，但会延长分析时间。 二、分离度公式 由上式可知： (1)增加塔板数可以提高分离度 (2)k值的最佳范围是：1＜k＜10 (3)相对保留值α增大，能显著地提高分离度 两根同种色谱柱的相互关系式： 三、分离度的最佳化 1、定性分析最低要求： 2、用峰高法进行定量分析： 3、用测量峰面积法进行定量分析： 4、相邻两组分的响应信号差别越大，所需的 分离度值越大。 （二）参数影响 2、分离度与 的关系 分离度 与 成正比。当 趋于0时， 也趋于0；当 值增大时， 项增大， 随之增大；当 值太大时， 增大对 增大的贡献极小，并且分析时间大大延长，导致谱峰扩展严重，有时甚至造成谱带检测的困难。所以应将 值控制在适当的范围内。从分离度、分离时间及对峰的检测等方面综合考虑， 的最佳值一般控制在2~10之间。 由 图看出：当k＞10时，随容量因子增大，分离度的增长是微乎其微的。一般取k为1～10最宜。对于GC，通过提高温度，可选择合适的k值，以改进分离度。而对于LC，只要改变流动相的组成，就能有效地控制k值。它对LC的分离能起到立竿见影的效果 3、分离度与 的关系 当 ， 时，不能实现分离。但 值的微小变化都对 有很大影响，因此增大 值是改善分离度最有力的手段。 色谱柱温度在色谱分离中所起作用 色谱柱温度在色谱分离中扮演既重要又复杂的双重作用。柱温既是热力学因素，又是动力学因素。 样品量的影响 每一色谱柱的固定相，都有一定的样品线性容量范围，在该范围内，进样量增加，色谱峰高增加，色谱峰区域宽度和保留时间不变。若样品量超过线性容量范围，进样量增加，容量因子k下降。 对于分析分离，为获得必需的分离度，一般进样量保持在线性容量范围以下。 色谱柱固定相的样品容量，决定于固定相的性质和用量。 某商品色谱柱有关说明书内容为“SE-54” GC 柱，柱效2500，这种表示方法正确吗？为什么？ 不正确。该说明书虽给出了所用何种固定相，并标明是气相色谱柱，但是对于柱效的描述是不完整的。根据范氏方程，影响柱效的因素有扩散系数、液膜厚度、组分分配比等，特别是不同组分在同一根柱子上的柱效是不相同的。因此，在采用塔板数评价一根色谱柱的柱效时，必须指明组分、固定相及其含量、流动相及操作条件（柱温、流速）等。这样，也有利于购买者按条件重复试验，来验证此柱是否达到该柱效。 例1：如果柱长L2为1m时，分离度为0.8，要实现完全分离(R＝1.5)，色谱柱Ll至少应有多长? 例2：用3m长的填充柱得到如图所示的色谱流出曲线，为了得到R＝1.5的分离度，填充柱最短需要多少米? 色谱定性和定量分析 （一）利用纯物质对照定性 （二）相对保留值法 （三）加入已知物增加峰高法 （四）保留指数定性法 （五）其它方法 如红外光谱法（IR）、质谱法（MS）、核磁共振波谱法（NMR）等结合进行定性鉴定。 （一）利用纯物质对照定性 在一定色谱条件下，一个未知物只有一个确定的保留时间。将已知纯物质在相同条件下的保留时间与未知物保留时间进行比较，就可定性鉴定。相同，未知物可能是已知的纯物质；不同，未知物就不是该纯物质。 纯物质对照法定性只适用于组分性质已有所了解，组成比较简单，且有纯物质的未知物。 是气相色谱定性中最常用的定性方法。 （二）相对保留值法 对于一些组成比较简单的已知范围的混合