分析化学第14章高效液相色谱.ppt

3. 固定相 原则上用于GC的固定相也可用于HPLC作固定相。但HPLC固定液易流失，因此常用的只有几种，极性由高到低为：?,?’-氧二丙腈(ODPN)、聚乙二醇(PEG)、三甲撑二醇(TMG)、十八烷(C18)、角鲨烷(SQ)。 根据涂渍方法的不同，可将固定相分为机械涂渍型和化学键合型，后者应用更为广泛。 1）机械涂渍固定相：将固定液通过机械混合的方法涂渍到表面多孔型(0.5-1.5%涂布量)或全多孔型载体(5-10%涂布量)上形成的液液色谱固定相。该种固定相最大的不足是固定液易流失、分离稳定性及重现性差，不适合梯度淋洗。 为减少固定液的流失，通常在柱前加一根很短的前置柱，该柱涂有与分析柱相同但有更高含量的固定液，使流动相进入分析柱之前，预先被固定液饱和。 2）化学键合固定相 化学键合固定相是通过化学反应将有机分子键合在载体表面所形成的柱填充剂，具有稳定、流失小、适于梯度淋洗等特点。这种固定相分离机理既不是简单的吸附，也不是单一的液液分配，而是二者兼而有之。化学键合的表面覆盖度决定哪种机理起主要作用。对多数键合相来说，以分配机理为主。 通常，化学键合相的载体主要是硅胶（表面有硅醇基）： Si-O-R：对热不稳定、遇水、乙醇等强极性会水解，使酯链断裂，因此只适于以不含水或醇的流动相。 Si-R(或Si-N)：不水解，热稳定性比硅酸脂好。但所用的格氏反应不方便。使用水溶液作流动相时，其pH应在4-8之间。 Si-O-Si-R：不水解，热稳定性好，在pH2-8范围内对水稳定。 3）. 正相和反相键合色谱法 在HPLC分析中，有时要在流动相中加入适量的盐(碳酸铵、四烷基铵盐)或酸，为什么？ 答：都是为防止峰形拖尾。加入盐类是为了减少待测物与键合相表面的残留硅醇基作用；加入酸是抑制酸类待测物的离解，使其以游离酸在柱内分离。 何为正相色谱，何为反相色谱？ 正相色谱 低极性流动相 反相色谱 高极性流动相 中等极性流动相 中等极性流动相 时间 时间 时间 时间 待测物极性：ABC 正、反相色谱中极性和保留时间的关系 时间，min 固定相：C1 固定相：C8 固定相：C18 硅胶-烷基键合相中烷基链长对反相色谱分离的影响 1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯 可见：反相键合色谱中，键合相碳链越长，分离效果越好。 将离子交换原理和液相色谱技术相结合，测定各类阴、阳离子的分离分析方法。它既适于无机离子，也适于有机物分离，如蛋白质、氨基酸、核酸等。 1. 原理：利用不同离子对固定相的亲和能力（离子交换能力）的差别实现分离。待测离子与离子交换树脂固定相上带电荷基团或游离离子发生可逆交换反应： 二、离子交换色谱 对阳离子，滞留顺序为： Fe3+, Ba2+, Pb2+, Sr2+, Ca2+, Ni2+, Cd2+, Cu2+, Co2+, Zn2+, Mg2+, UO22+, Tl+, Ag+, Cs+, Rb+, K+, NH4+, Na+, H+, Li+ 对阴离子，滞留顺序为：柠檬酸根, SO42-, C2O42-, I-, HSO4-, NO3-, CrO42-, Br-, SCN-, Cl-, HCOO-, CH3COO-, OH-, F- 思考：待测阳离子电荷越小、其水合离子的半径越大，则越先出峰？对吗？ * * 第14章 高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography (HPLC) 14.1 概述 14.2 HPLC仪器 包括：高压输液装置；进样系统； 分离系统； 检测系统；辅助系统。 14.3 流动相和固定相简介 14.4 高效液相色谱方法各论 分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱、尺寸排 阻色谱和亲和色谱 14.1 概述 高效液相色谱是以液体为流动相的色谱方法。 按照固定相不同分为：液液分配色谱；液固吸附色谱；离子交换色谱；尺寸排阻色谱(凝胶渗透色谱)。 此外，还有亲和色谱、平板色谱(薄层色谱)等。 早期液相色谱，包括Tswett的工作，都是在直径1~5cm, 长50~500cm的玻璃柱中进行的。为保证有一定的柱流速，填充的固定相颗粒直径多在150~200?m范围内。即使这样，流速仍然很低(1mL/min)，分析时间仍然很长！ 当加压增加流速(真空或空气泵)时，尽管分析时间减少，但柱塔板高度