实用仪器分析---9.色谱分析法-1.ppt

选择性系数越大，交换的离子数目越多，树脂与离子之间的相互作用越强； 选择性系数越大，B离子就越容易保留而难于洗脱。 第四节 液相色谱类型 交换离子电荷越高、半径越小，作用越强; 磺酸型阳离子交换树脂，离子选择性系数由大到小顺序为： 强碱型阴离子交换树脂，离子选择性系数由大到小顺序为： 第四节 液相色谱类型 2.固定相 苯乙烯树脂等高分子聚合物作为骨架（基质）； 树脂中交联剂含量用交联度表示: 第四节 液相色谱类型 交联度越大，网状结构越紧密，离子进入树脂阻碍作用越大，使分离速度下降；但同时使大体积离子进入树脂困难，具有一定的选择性。 苯乙烯树脂采用苯乙烯单体，二乙烯苯为交联剂而形成球形网状结构; 离子交换树脂的交换能力用交换容量表示; 理论交换容量为1克干树脂含离子交换基团的物质的量。 在实验条件下，1克干树脂真正含参加交换反应基团的物质的量为实际交换容量。 第四节 液相色谱类型 ⑴薄壳树脂（直径30-40微米） 优点：传质快，柱效率高，耐高压。 缺点：交换容量小。 ⑵多孔树脂(直径10-20微米) 优点：交换容量大。 缺点：传质比较慢，柱效率略微下降，不耐高压。 ⑶离子键合相 具有以上二者的优点。 ⑷ 特殊以纤维素作为骨架，适合于生物大分子的分离和分析。 第四节 液相色谱类型 3.流动相 一般采用缓冲液作为流动相； 分析有机酸碱时，选择原则为缓冲液pH=pKa； 分析混合酸碱时，采用梯度洗脱方式； 离子强度增加，交换能力下降。 第四节 液相色谱类型 第四节 液相色谱类型 四、尺寸排阻色谱法 （Size exclusion chromatography，SEC） 凝胶色谱法、凝胶过滤色谱法、凝胶渗透色谱法或空间排阻色谱法; 凝胶是经过交联的多聚体，具有立体网状结构，内含大量液体（水），柔软而富有弹性。 第四节 液相色谱类型 采用凝胶作为固定相的色谱分析法。 为色谱柱的分离效率 两种物质相对保留时间时， 不能分离； 但是 太大， 太低，也不能进行有效分离。 第三节 色谱基础理论 二、分离度及其影响因素 越小， 越大，分离度越高。 第三节 色谱基础理论 在 时，2个峰均符合正态分布，则 第三节 色谱基础理论 Rs=0.60 80%分离 Rs=1.00 98%分离 Rs=1.25 99.8%分离 容量因子 第三节 色谱基础理论 相对保留时间 第三节 色谱基础理论 分离度影响因素： ⑴容量因子 容量因子增大，分离度增大。 ① 大于5， 增大程度降低； 大于15，分析时间长，色谱峰较平坦，不利于定性、定量分析； ② 若 大于10或小于1，可改变流动相极性，使其在1-10范围内。 ③ 最佳范围为2-5 第三节 色谱基础理论 ⑵相对保留值 相对保留时间 增大，分离度增大； 为达到分析目的，可通过改变梯度洗脱程序、温度程序、流量程序来改变 。 第三节 色谱基础理论 ⑶理论塔板数 理论塔板数增大，峰越窄，分离效果越好。 第三节 色谱基础理论 三、色谱峰展宽与柱效-柱内因素 ⒈涡流扩散 样品组分在柱中碰撞填料颗粒形成紊乱流动，使同一组分粒子在色谱柱中通过不同路途而先后到达检测器，色谱峰展宽，柱效率降低。 为填料平均粒度 为填料均匀度 涡流扩散 第三节 色谱基础理论 ⒉纵向扩散 样品分子随流动相流动时本身的分子扩散，使色谱峰展宽，柱效率降低。 为分子在流动相中的扩散系数 为流动相流速 为一常数 纵向扩散 第三节 色谱基础理论 ⒊传质速率 样品组分在色谱柱中两相溶解、扩散、分配的过程称为传质过程，由于在此过程中传质速度快慢不平衡而引起的色谱峰展宽，柱效率降低。 固定相 流动相 流速 第三节 色谱基础理论 ①样品分子在流动相中传质过程 为分子在流动相中扩散系数 为填料均匀度 为流动相流速 为一常数 第三节 色谱基础理论 ②样品分子在固定相孔内滞留区传质过程 固定相微孔内流动相称为滞留区 为一与容量因子有关的常数 第三节 色谱基础理论 ③样品分子在固定相内传质过程 为固定相厚度 为样品分子在固定相内的扩散系数 为一与容量因子有关的常数 第三节 色谱基础理论 板高-流速方程式（范递姆特方程） 第三节 色谱基础理论 第三节 色谱基础理论 第三节 色谱基础理论 三、色谱峰展宽与柱效-柱外因素 ⒈柱前因素 主要由进样方式决定，如进样速度慢。 ⒉柱后因素 主要由记录方式所决定，如记录纸走纸速度慢。 第三节 色谱基础理论 1.原理 一、液液色谱法（LLC） 根据物质在流动相和固定相中溶解度不同，有不同的分配而实现分离，又称分配色谱法； 流动相和固定相均为液体、互不相溶