实验九 细菌鉴定中常用的生理生化反应-反应观察部分.ppt

记录 1 2 3 4 5 6 7 8 Escherichia coli + + + + - - - - Bacillus subtilis - - - - + + + + 结果与讨论 记录上述各试验结果 在吲哚试验和硫化氢试验中细菌各分解何种氨基酸? 结合大肠杆菌与枯草杆菌的糖代谢途径分析试验结果 糖发酵试验：菌种利用分解糖的种类和结果不同 在肠道细菌鉴定上尤为重要；溴甲酚紫产酸后可由紫色（pH6.8）---转变为黄色（pH5.2） 在接种后，轻轻摇动试管，使其均匀，防止导致的德汉氏/杜氏小管进入气泡：接种后，气体倒置小玻管的10％以上作为判定目标。 * IMViC试验： 主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水的检查 硫化氢试验也是检查肠道细菌的生化试验 IMViC是吲哚(Indol test)试验、甲基红(Methyl red test)试验、伏-普(Voges-Prokauer test, V.P)试验、柠檬酸盐（Cirate test）利用试验的缩写 * 甲基红(Methyl red test)试验：用来检测有葡萄糖产生的有机酸；指示剂甲基化由橙黄色（pH6.3）转变为红色（pH4.2）即为甲基红反应。尽管所有肠道微生物都能发酵葡萄糖产生有机酸，但这个实验在区分大肠杆菌和产气肠杆菌上仍有价值（因为，大肠杆菌培养后期仍能维持酸性pH4，但产气肠杆菌则转化有机酸为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，pH6）。该实验中，注意甲基红试剂不要加的太多，以免出现假阳性。（大肠杆菌-阳性vs 产气肠杆菌-阴性） * 伏-普(Voges-Prokauer test, V.P)试验：测定细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。丙酮酸进行缩合、脱羧生产乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性条件下能被空气中氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基作用，生成红色化合物，即VP阳性反应。有时候为了使反应更为明显，可加入少量含胍基的化合物，如肌酸等。（大肠杆菌-阴性vs 产气肠杆菌-阳性） * 柠檬酸盐（Cirate test）利用试验：检测柠檬酸盐是否被利用；细菌利用培养基中柠檬酸盐和磷酸铵后，产生碱性化合物，是pH升高；当加入1%溴麝香草酚蓝指示剂，培养基就会由绿色转变为深蓝色；培养基pH不要偏高，以淡绿色为宜；（大肠杆菌-阴性vs 产气肠杆菌-阳性） * 吲哚(Indol test)试验：检测吲哚的产生（有些细菌产色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成红色的玫瑰吲哚）；试验中用的蛋白胨水培养及中宜选择色氨酸含量高的蛋白胨。培养24h～48h后，加入10-20滴乙醚，振荡数次，静置1－3分钟，沿试管壁滴加2滴吲哚试剂于培养物液面，观察结果。（大肠杆菌-阳性vs 产气肠杆菌-阴性） * 菌种鉴定中常用的生理生化反应 实验目的和内容 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法； 通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样性； 了解细菌在不同培养基中的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义； 实验仪器,材料和用具 实验仪器 37℃恒温培养箱、20℃恒温培养箱（室温代替）。 微生物材料 大肠杆菌、枯草杆菌这二种菌种的斜面各1支。 试剂 甲基红试剂、V．P试剂、吲哚试剂、格里斯试剂(硝酸盐利用试验)、卢戈氏碘液(淀粉水解试验) 实验仪器,材料和用具 实验用具 试管：每份每个试验2支试验，7个试验共14支。 无菌平皿：每份2个 杜氏小管：每份4个。 接种环、酒精灯、试管架、记号笔。 实验仪器,材料和用具 培养基 葡萄糖发酵培养基 乳糖发酵培养基 甲基红(葡萄糖蛋白胨水培养基) V.P试验(葡萄糖蛋白胨水培养基) 柠檬酸盐利用试验（柠檬酸盐利用试验） 吲哚试验(蛋白水培养基) 淀粉培养基 实验原理－－细菌生化试验 糖(醇)类发酵试验 不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶，因而发酵糖(醇)的能力各不相同。其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。酸的产生可利用指示剂来判定。在配制培养基时预先加入溴甲酚紫[pH5.2(黄色)一6.8(紫色)]，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。 实验步骤 糖(醇)类发酵试验 编号 在各试管上分别标明发酵培养基名称，所接种的菌名和组号，下同。 接种 取葡萄糖发酵培养基2支，按编号1支接种大肠杆菌，另1支接种枯草杆菌。同样取2支乳糖发酵培养基，1支接种大肠杆菌，1支接种枯草杆菌。 在接种后，轻轻摇动试管，使其均匀，防止导致的德汉氏/杜氏小管进入气泡。 将已接种好的培养基置37℃温箱中培养24h。 观察结