实验一 培养基的制备、消毒灭菌及油镜的使用.ppt

微生物实验课注意事项 课程简介：必修课，24学时 考试成绩按以下公式计算： 课堂纪律 严格遵守实验室规章制度 严肃课堂纪律 不允许无故旷课、早退（1次） 迟到（3次） 不能做与实验无关的事 实验室安全和卫生 安全 实验室严禁吸烟。 注意用水、防电和防火 正确使用化学试剂和仪器 三 油镜的使用 学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜的使用技术及维护的基本知识 初步认识细菌的基本形态 实验原理1 显微镜的构造 1.光学部分:目镜 、 物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等)。它使检视物放大,生成物象。 油镜使用的原理 油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 显微镜保养和使用中的注意事项 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。 二、显微操作 实验报告与问题讨论 本次实验课结束请确保油镜头擦拭干净！请第一组同学留下值日下周再见！ 浸没油与玻璃的折射率相近 很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。 现场演示 1.低倍镜观察：粗调、细调。依次再进行中倍、高倍观察 2.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 3.换片：另换新片，必须从第1条开始操作。 4.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。注意：油镜使用完毕后一定要用二甲苯擦拭镜头 用油镜观察细菌三形永久装片。 1、培养基配制的原理、方法、步骤及注意事项。 2、干热灭菌、压力蒸汽灭菌方法的原理和方法步骤 3、思考题 1）培养基应具备哪些条件？为什么？ 2）在配制培养基过程中应注意哪些问题？为什么？ 3）培养基配制好后，为什么要立即灭菌？如何检查灭菌是否彻底？ 4）压力蒸汽灭菌时，为什么要将锅内冷空气排尽？ 5）灭菌完毕后，为什么要待压力降到0时才能打开排气阀，开盖取物？ 6 ）使用油镜时，为什么必须用香柏油？ 7 ）镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？ * * 微生物学实验 平时（60％）＋操作考试（40％） 卫生 每次实验需留下6位同学值日，协助保持实验室清洁 1、了解培养基的概念、种类和用途，明确培养基的配制原理。 2、学习掌握培养基配制的一般方法和步骤。 3、掌握高压蒸汽灭菌的原理和方法步骤。 实验目的 一 培养基的配制 培养基(culture medium)是指人工配制的、适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。 自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适。 为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求，还必须控制培养基合适的pH。 实验原理 常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%。 实验原理 (continued) 常用培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养；高氏一号培养基用于培养放线菌；麦芽汁培养基和豆芽汁培养基通常用于酵母菌的培养；马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养霉菌。 实验分组安排 5-6人一组，配制牛肉膏蛋白胨固体培养基和马丁氏固体培养基 每组 500ml ?斜面1支（每人），余装三角瓶 牛肉膏蛋白胨培养基配方： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g 水 1000ml pH 7.4-7.6 1、称量及溶化 2、调pH 3、加琼脂、溶化、定容、（过滤） 4、分装（每人一只试管）、加塞、包扎 5、灭菌 6、摆斜面 操作步骤