实验1微生物显微镜的使用细菌形态的观察和细菌的革兰氏染色.ppt

* 微生物与动植物细胞不同，因为动植物细胞不能独自在自然界生存，仅能作为多细胞生物的确一部分存在。单独的确微生物细胞一般都能实现自身的生命过程，如生长、能量代谢和繁殖。 例外，大型真菌：灵芝 ; 微生物身体的结构相当简单，既不像动物那样有消化、呼吸、运动等器官，也不像植物那样有根、茎、叶的分工，它们只是浑然一体，是世界上最简单的生物 .今天我们知道的微生物可能还只是地球上微生物的一部小分，有人估计最多不过10%。 目的要求 掌握细菌涂片标本的制备方法及革兰氏染色法的步骤 识别细菌的革兰氏染色结果 学习无菌操作技术 细菌革兰氏染色 实验仪器、材料和用具 (1)显微镜、镜油、擦镜纸、擦镜液 (2)结晶紫、革氏碘染液、95%酒精、番红染液 (3)载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、 (4)枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌 液体培养液、牙垢 实验原理 实验步骤 涂片 左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧,冷却后从试管中取菌液一滴,在洁净载玻片上做一涂膜; 从固体斜面或平板上取菌时,用无菌接种环取少量菌体,涂抹均匀于玻片上预先滴有的一滴自来水中; 干燥 在空气中自然干燥 用镊子夹住涂片一端,在火焰上连续通过三次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜. 固定 3.95%的乙醇脱色：滴加95%的乙醇，轻轻摇动玻片进行脱色，直至流出的乙醇无紫色时，水洗； 染色步骤 1.结晶紫初染 ：滴加数滴结晶紫染液于细菌涂片上， 染色1分钟，水洗； 2.卢戈氏碘液媒染 ：用卢戈氏碘液覆盖涂片1分钟，水洗； 4.蕃红复染： 滴加蕃红染液复染2分钟以上，水洗，吸干镜检。 载玻片上滴加一滴香柏油，放油镜下镜检;注意标本中细菌的形态、大小,排列,和颜色 镜检 染色结果： 革兰氏阳性菌呈紫色; 革兰氏阴性菌呈红色; 金黄色葡萄球菌的染色结果 讨论 记录革兰氏染色结果,并描述形状,菌体排列和颜色, 看看与理论上是否相同;如不同,分析原因; 分析影响革兰氏染色结果的因素; 牙垢里大概能看到几类菌，哪几种较多？ 注意事项 载玻片是否干净,取菌量、合适的菌龄、 热固定及每一步水洗和酒精脱色程度是实验成功的关键 禁止把染液倒入水池中,回收到废液桶中 影响革兰氏染色结果的因素 ★菌龄：取处于对数生长期的细菌，此时结果典型。 ★操作： 热固定：温度不能太高，否则会造成细菌结构的破坏。 染色：染料应过量，避免结晶。 初染和媒染：时间在30-60s为宜。 复染：时间可稍长 脱色：约30s，以流下的脱色液无色为准,否则制片上会留有杂质或造成假阳性或假阴性。 水洗：要充分，否则制片上会留有杂质。 萋－纳氏抗酸染色法 染液：石炭酸复红，3％盐酸酒精，碱性美蓝染液。 菌液：枯草芽孢杆菌 器具：显微镜，载玻片，酒精灯，接种环。 （1）用接种环挑取一环枯草芽孢杆菌菌液，涂于玻片上做成薄膜，自然干燥后经火焰固定。 （2)滴加石炭酸复红液于涂片上，用玻片夹住涂片微火加热，保持染液冒蒸汽约5分钟， 切勿蒸发至干或使染液沸腾。 染色法： （3）冷后，水冲洗。 （4）以3％盐酸酒精脱色，至片上红色全部脱去为止。 （5）水冲洗后，以碱性美蓝液复染1分钟，水洗，待干，镜检。 结果：枯草芽孢杆菌芽孢被染成红色， 而菌体则被染成蓝色。 细菌单菌落观察结果 * 微生物与动植物细胞不同，因为动植物细胞不能独自在自然界生存，仅能作为多细胞生物的确一部分存在。单独的确微生物细胞一般都能实现自身的生命过程，如生长、能量代谢和繁殖。 例外，大型真菌：灵芝 ; 微生物身体的结构相当简单，既不像动物那样有消化、呼吸、运动等器官，也不像植物那样有根、茎、叶的分工，它们只是浑然一体，是世界上最简单的生物 .今天我们知道的微生物可能还只是地球上微生物的一部小分，有人估计最多不过10%。 * 微生物与动植物细胞不同，因为动植物细胞不能独自在自然界生存，仅能作为多细胞生物的确一部分存在。单独的确微生物细胞一般都能实现自身的生命过程，如生长、能量代谢和繁殖。 例外，大型真菌：灵芝 ; 微生物身体的结构相当简单，既不像动物那样有消化、呼吸、运动等器官，也不像植物那样有根、茎、叶的分工，它们只是浑然一体，是世界上最简单的生物 .今天我们知道的微生物可能还只是地球上微生物的一部小分，有人估计最多不过10%。 * 微生物与动植物细胞不同，因为动植物细胞不能独自在自然界生存，仅能作为多细胞生物的确一部分存在。单独的确微生物细胞一般都能实现自身的生命过程，如生长、能量代谢和繁殖。 例外，大型真菌：灵芝 ; 微生物身体的结构相当简单，既不像动物那样有消化、呼吸、运动等器官，也不像植物那样有根、茎、叶的分工，它们只是浑然一体，是世界上最简单的生物 .今