对羟基苯甲酸酯的hplc分析2016.ppt

实验步骤——III 在最佳流动相配比条件下，以0.8、1.0、1.2 mL/min不同的流动相流速下取混合标准溶液25μL进样分析，以同样原则选定最佳流动相流速。 问题I：每次更换流动相还需等待5min吗？ 问题II：可以利用本步骤实验数据进行定量校正因子的确认吗？ * 条件试验 II—流动相流速 实验步骤——IV 在最佳实验条件下，分别取纯甲酯、丙酯、丁酯各10μL进样，记录各色谱峰保留时间，与步骤III所得结果相比较，进行定性分析。 * 定性分析 实验步骤——V 在最佳实验条件下，分别取25 μL混合标样进样，以峰面积对浓度作标准曲线。 要求该曲线的相关系数大于0.99，如果不满足则可对明显偏离的实验进行重测。 * 标准曲线制作 实验步骤——VI 取25μL 未知试样进样分析（重复3次），外标法定量。 结束：用100%甲醇冲洗仪器10分钟，依次关闭工作站和仪器。 * 未知试样测定 实验步骤——VII 按要求将实验数据填入表格中，进行相关参数的确认，用外标法和归一化法分别计算样品的检测结果，并进行比较。 * 数据处理 八、思考题 根据实验数据，讨论HPLC和GC中定量分析方法不同的原因？ 所用的VWD检测器适用于检测哪些有机物？为什么？ 若实验获得的色谱峰面积太小，应如何改善实验条件？ 为什么HPLC多在室温下进行检测分离，而GC要在相对较高的柱温下操作？ * * * *  * 定量校正因子，为使峰面积能够准确地反映待测组分的含量，就必须先用已知量的待测组分测定在所用色谱条件下的峰面积，以计算定量校正因子 * HPLC分析实验 HPLC分析实验 对羟基苯甲酸酯同系物的HPLC分析 毛侦军 maozhenjun@zju.edu.cn * 一、实验目的 学习高效液相色谱仪器的基本使用方法。 理解和掌握高效液相色谱分离分析基本原理。 学会用外标法和校正归一化法进行色谱定量分析。 二、HPLC 简介 1967年，高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography，HPLC)正式问世。 高压：流动相为液体，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压，300～600×105 Pa。 高速：分析速度快、通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。 高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。 高灵敏度：紫外检测器可达10-9g／mL，荧光检测器可达 　10-11g ／mL 。 * HPLC应用广泛 由于HPLC分离分析的高灵敏度、定量的准确性，特适于非挥发性和热不稳定组分的分析，因此，在医药、食品、农业、生命科学、化工、环保等领域都有着广泛的应用。 如氨基酸、蛋白质、核酸、碳水化合物、药品、多糖、高聚物、农药、抗生素、胆固醇、金属有机物等分析，大多是通过HPLC来完成的。 各种HPLC方法的应用范围及对象 * 液相色谱（HPLC） 气相色谱（GC） 相同点 色谱柱可反复使用，分离效能高，高灵敏度，进样量小，分析速度快，使用范围广 分析对象 高沸点、不稳定的天然产物、生物大分子、高分子化合物、离子型样品 气体、沸点较低、热稳定性好的化合物 流动相 不同极性的液体（有一定亲和作用） 惰性气体（无亲和性，只起运载作用） 温度 一般室温 较高 检测器 紫外吸收检测器（光电二极管阵列检测器），荧光检测器，电化学检测器，蒸发光散射检测器，质谱检测器，示差折光检测器 氢火焰离子化检测器（FID），热导检测器（TCD)，氮磷检测器（NPD），火焰光度检测器（FPD），电子捕获检测器（ECD)等类 HPLC与GC的比较 Agilent 1100仪器结构图 手执控制器 检测器 柱温箱 自动进样器 泵 脱气机 溶剂柜 三、Agilent-1100 液相色谱仪 高压输液系统：单元、双元、 四元泵 进样系统：手动、自动 分离系统：C18、C8色谱柱 检测系统：检测器 * 1、高压输液系统 储液器： 0.5L～2L的玻璃瓶（白色、棕色）。 脱气装置： 将气体从溶剂中除去，离线脱气和在线真空脱气。 高压输液泵： 恒压泵、恒流泵 恒流泵使用最广泛，有单活塞和双活塞往复泵。 流量准确、可调，流速为0.5～2 mL/min，泵最大流量范围为5～10mL/min（排气泡）。 流动相 HPLC 级溶剂 水为超纯水 过滤 (最大0.45 μm, 0.2 μm最好) 脱气，尤其在低流速时 相溶 * 液相色谱手动进样器 2、进样系统 * 准备时，流动相直接进柱，进样口1与定量管连接，样品充满定量管后，多余样品从2流出。 进样时，泵将流动相压入定量管，将样品全部携