微生物学检验(第3版)培养基的制备.ppt

检验学院：汤丽霞、何印蕾 　　　　费世杰、唐玉莲  1. 、明确培养基的配制原则； 2、掌握配制培养基的一般方法和步骤； 3. 掌握平板划线法、斜面、液体和半固体培养基等各种接种法。. 4. 熟悉接种细菌用具、接种细菌的环境要求和无菌操作要领。 5 熟悉常用培养基的种类及其用途。 基础培养基 营养培养基 鉴别培养基 选择培养基 特殊培养基。  步骤和方法 （1）调配成分： 再锥形瓶或大容量烧瓶中，加定量蒸馏水，按培养基处方用量准确称取各种成分，使其充分混合。 （2）溶解： 向上述瓷缸中加入所需要的水量，搅拌，加热使其溶解。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化过程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。 （3）校正PH ： 用玻璃棒沾少许液体，测量PH值。用氢氧化钠和盐酸调节PH。 一般将培养基的PH调至7.2—7.6左右。经高压灭菌后其PH可发生0.1—0.2变动。（若用NaOH校正，高压灭菌后PH下降0.1—0.2；若用NaCO3校正高压灭菌后PH升高0.1—0.2。） （4）澄清过滤 自配的培养基通常会有一些浑浊或沉淀，需滤过澄清后方可使用。液体或半固体培养基常用滤纸过滤，固体培养基在熔化后趁热以绒布或双层纱布加脱脂棉过滤。 （5）分装： ①基础培养基：一般分装于容量为500ml锥型瓶灭菌后备用，以便随时分装倾注平板或配制营养培养基等； ②琼脂斜面：通常在融化后分装于试管，量约为试管高的1/4—1/3，加塞后灭菌，趁热摆成斜面，斜面长度约为试管长度的2/3，且保持试管下端有1cm柱高； 实验步骤 ③半固体培养基：分装量为试管容量的1/4—1/3，加塞灭菌后趁热直立凝固； ④琼脂高层培养基：分装量为管长的2/3（接种厌氧菌用），灭菌后趁热直立凝固； ⑤琼脂平板：先将灭菌琼脂融化后冷却至500C左右，以无菌操作倾注于灭菌平皿内（内径90cm的平皿约15—18ml），水平旋转平皿，待琼脂凝固后将平皿翻转，置40C保存备用。 （ 6）灭菌： ①由耐热物质配成的培养基 （7）质量检查 ①无菌试验 （8） 保存： 制备好的培养基应存放于冷暗处或40C冰箱。 倒平板技术 1、平板划线分离法 微生物的接种技术 划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂. 第一次划线应占平皿面积的1/4,以后每次划线约占面积的1/4—1/5. 划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复. 每次划完后接种环应灭菌. 微生物的接种技术 微生物的恒温培养 固体培养基：血琼脂、中国兰。 10人/瓶/300ＭＬ.共配5瓶、制成110个平板。 克氏双糖：1人/支/3ML。共配300ＭＬ。配成55支 营养肉汤：1人/支/3ML。共配300ＭＬ。配成55支 半固体：1人/支/2ML。共配200ＭＬ。配成55支 实验报告 实验目的。(10分) 培养基的制备(做什么写什么)(45分) 细菌的接种方法(三区画线法） （15分） 液体培养基的接种（10分） 半固体培养基的接种、 （10分） 斜面培养基的接种(10分) 待平板完全冷凝后，将平板倒置37℃恒温箱中培养24～48小时，检查分离结果。将培养后长出的单个菌落分别挑取接种到牛肉膏蛋白胨培养基的斜面上，然后置于37℃恒温箱中培养，待菌苔长出后，检查菌苔是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的微生物，若有其它杂菌混杂，就可再一次进行分离、纯化，直至获得纯培养。 培养与移植 用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，然后分别倒置于28℃和37℃温箱中培养后，再挑取单个菌落，直至获得纯培养。 稀释涂布平板法 分区划线 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目