微生物的培养与利用 - 上课.ppt

（六）、结果分析与评价 培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 （七）、菌种保藏： ①短期保存： 上4℃保藏，缺点是菌种易被污染或产生变异。 ②长期保存：采用 －20℃冷冻箱中保藏。 固体斜面培养基 甘油管藏法 （1ml甘油＋1ml菌液） （八）微生物的鉴定 1、原理 2、依据：菌落或菌苔的特征 3、培养基类型：鉴别培养基（按用途划分） 4、实例 1、分解纤维素的微生物的分离 1）纤维素酶的组成及作用 组成：一种 酶，它至少包括三种组分，即 。 作用： 复合 C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶 纤维二糖 葡萄糖 纤维素 + 染料→红色复合物 （纤维素 + ）+ 刚果红染料 → 培养基中出现以纤维素分解菌为中心的 刚果红 纤维素酶 透明圈 2）实验原理 3)培养基：是以 为唯一碳源的选择培养基。 4）筛选流程 土壤取样— → →将样品涂布到 的培养基上→挑 选 的菌落。 纤维素粉 选择培养 梯度稀释 鉴别纤维素分解菌 产生透明圈 不同菌落的透明圈大小不同可以说明微生物体分解纤维素酶能力的大小。 2、土壤中分解尿素的细菌的分离 (1)分离原理： ①土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合成 ，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起 作用。 ②使用以 为唯一氮源的培养基能促 进 细菌的生长和繁殖，并抑制或阻止其 他微生物的生长，从而分离出目的菌。 脲酶 催化 尿素 分解尿素 鉴定方法： 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，利用此培养基进行细菌培养，观察培养基的颜色变化（红色菌落）。 1、间接计数法(活菌计数法)： ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 ②计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。 （九）统计菌落数目的方法 特别提醒 统计菌落数目的注意事项： ①实验时，每一浓度至少涂布3个平板，以增强实验的说服力和准确性。 ②一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。 ③统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。 统计结果一般用菌落数而不是用活菌数表示。 ④设置对照。排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 2.显微镜直接计数法 采用细菌计数板或血球计数板，显微镜下直接计数 （计算一定容积里样品中微生物的数量）。 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 用10×镜观察并将计数室移至视野中央。 在10×镜下计数：计数4个（或5个）中格 的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出计数区总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。 注意事项：计上不计下，计左不计右。 显微镜直接计数法缺点： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； （09宁夏理综）32．生物选考题 A．[生物———选修I生物技术实践] 某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。 （1）培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了___ 和_____ 。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是____ 和 ____。 （2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是____ __ _。 碳源 氮源 无机盐 高压蒸汽灭菌 水 （09宁夏理综）32．