教学课件：课题2.3土壤中尿素细菌的分离---分解纤维素的微生物的分离.ppt

尿素分子的立体结构;（一）筛选菌株;（二）统计菌落数目;;（二）设置对照;[一]土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。;[二]样品的稀释;[三]微生物的培养与观察;[一]无菌操作 1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。 [三]规划时间;1、结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。 2、是否获得了某一稀释度下，菌落数目在30——300的平板。在这稀释度下，是否至少有两个平板的菌落数相近？ 3、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？;（一）空气中微生物总数的检测 （二）水中细菌总数的检测 （三）牛奶中细菌的分离与计数 （四）土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数;专题2 :微生物的培养与应用;课题目标;一、基础知识;（一）纤维素与纤维素酶:;（一）纤维素与纤维素酶:;小实验：体会纤维素酶的作用;小实验：体会纤维素酶的作用; 刚果红染色法;: 刚果红（Congo Red,简称CR)染料可以与像纤维素这样的多糖形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。在含纤维素的培养基中加入刚果红时便形成了红色复合物。当纤维素被纤维素分解酶分解后，刚果红 —纤维素复合物就无法形成，培养基上会出现以纤维素分解菌为中心的透明圆圈，通过透明圆圈来筛选纤维素分解菌。;（二）纤维素分解菌的筛选;二、实验设计;1、培养基类型：选择培养基 2、培养基特点：纤维素作为碳源。 3、培养基配方：;4、培养基的制备： （1）计算、称量：按比例和用量准确称取纤维素粉、NaNO3、Na2HPO4．7H2O、 KH2PO4、 KCl、 MgSO4`7H2O、酵母膏、水解酪素备用； （2）溶化：蒸馏水中加入上述药品后搅拌使溶解，完全溶解后补加蒸馏水至1000ml；调pH。 （3）灭菌：将50ml培养基用玻棒转移至三角瓶中，塞上棉塞，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹（5-8套为一包），放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。（液体培养基不用倒平板）;1、培养基类型：鉴别培养基 2、培养基特点：加入刚果红。 3、培养基配方：;4、培养基的制备： （1）计算、称量：按比例和用量准确称取酵母膏、 CMC—Na、KH2PO4 、琼脂、土豆汁 备用； （2）溶化：蒸馏水中加入酵母膏、 CMC—Na、KH2PO4 、土豆汁后搅拌使溶解充分加入15g琼脂加热熔化，并不断搅拌防，琼脂完全融化后补加蒸馏水至1000ml；调pH;（3）灭菌：将适量培养基用玻棒转移至三角瓶中，塞上棉塞，高压蒸气灭菌，在压力100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿干热灭菌，在160～170 ℃下灭菌2h。 （4）加入刚果红(CR):配制10mg/ml的CR溶液，灭菌后，按照每200 ml培养基加1 ml的比例加入CR溶液，混匀。 （4）倒平板：待培养基冷却到50 ℃左右时在酒精灯火焰附近倒平板。（倒平板操作同上节）;（一）土壤取样：资料一;旁栏思考:如果找不到合适的环境，可将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应埋进土壤中多深？;（二）选择培养：资料二;（二）选择培养：资料二;　　参照选择培养基的比例配置，回答下列问题;（3）你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？;3.选择培养的操作方法：;旁栏思考：为何选择培养能够“浓缩”所需的微生物？;　　按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数到106; 将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml涂布在CR鉴别培养基上，30℃倒置培养;刚果红染色法：含CR的鉴别培养基;2、资料二：刚果红染色方法 （1）方法一：（先培养微生物再加入刚果红进行颜色反应）：在长出菌落的培养基上覆盖质量浓度为1mg/ml 的CR溶液，10-15min后倒去CR溶液，加入质量浓度为1mol/l的NaCl溶液，15min后倒掉NaCl溶液，此时产生纤维素酶的菌落周围将出现透明圈； （2）方法二：（在倒平板时就加入刚果红） ：配制10mg/ml的CR溶液，灭菌后，按照每200 ml培养基加1 ml的比例加入CR溶液，混匀后倒平板，等长出菌落后，产生纤维素酶的菌落周围将出现明显的透明圈。; 方法一　缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂