本科论文：银杏抑菌性及其内生真菌菌株筛选 ppt.ppt

1 EGb对细菌抑菌性很强：金黄色葡萄球菌＞枯草芽孢杆菌≥大肠杆菌；对真菌抑制效果不明显。 2 EGb相对于枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度是0.25%。 3 EGb相对于金黄色葡萄球菌的石碳酸系数是0.167。 4 EGb有很好耐热性，沸水浴1h之后抑菌性未衰减。 5在银杏树根里筛选的抑菌性最强的1号菌株，通过菌落形态观察和制片观察，判定为根霉。 6菌株特性研究得出：91h时菌体生长达到最高峰，84h时发酵液抑菌性最强。 7 菌株特性及发酵液抑菌性研究得出，最佳pH为7.0，最佳接种量5%。 四、结论 请各位老师批评指正 谢谢 答辩人：马恒元 图 3.6 EGb热稳定实验实物结果 结果 如图3.5所示，EGb沸水浴1 h之后，EGb抑菌性和对照相比变化不大，说明提取物中的抑菌性物质耐热性很强。10 min以下时抑菌性偏低，可能是因为沸水浴过程中，EGb浓缩，所以10 min时抑菌性有所增加。10 min以后抑菌性变化不大，可能是因为扩散限制原因，所以虽然EGb浓缩了，但是抑菌性没有继续扩大。有的研究证实低温长时间热处理对EGb影响较大，抑菌效果不明显;而高温短时间处理，银杏叶提取物的抑菌作用受影响较小。这可能是由于EGb提取方法不同，EGb所含的物质也不同，所以会有不同的耐热性。实物图如图3.6。 银杏根用自来水清洗干净后,在无菌操作箱内进行表面消毒, 先用75%乙醇消毒90s, 再用0.1% HgCl2溶液消毒5 min, 然后用无菌水把消毒后的树根冲洗4~5 次。用最后一次冲洗的水涂布豆芽汁葡萄糖培养基平板作对照。 在银杏树根中共分离出10株单菌落，斜面保藏。 内生真菌分离与筛选 1内生真菌分离 将菌种斜面活化后接种到豆芽汁葡萄糖液体培养基中，28℃摇床培养7d 后取出离心。将高温灭菌后的滤纸片贴在涂有不同供试细菌的牛肉膏蛋白胨培养基平板上， 再在每个滤纸片上加入等量的各种过滤液，37 ℃倒置培养36 h，测定抑菌圈直径。 实物图如图3.7，3.8所示。 内生真菌分离与筛选 2内生真菌筛选 图3.7 银杏树根内生真菌 图3.8 发酵液对三种细菌的抑制效果 结果 对10种菌株发酵培养，发酵液6000r/min离心后做抑菌性实验，得出1，4，6号菌株有抑菌性。对1，4，6号菌株再次做抑菌圈实验，得出1号菌株抑菌性最强。进行后续研究。 将筛选出的抑菌性最强的菌株平板活化，观察菌落形态。 1号菌株斜面，平板活化，菌落蓬松，菌丝发达，白色，有黑色孢子。 菌株的鉴定 1 菌落形态观察 将筛选出的抑菌性最强的菌株，显微镜制片观察。如图3.9所示 2 显微镜制片观察 菌株的鉴定 图3.9 银杏树根内生真菌切片观察结果 挑取菌丝制片观察，如图3.9所示，有假根，假根是Rhizopus（根霉属）等低等真菌匍匐菌丝与固体基质接触处分化出来的根状结构，具有固着和吸取养料等功能 。菌丝无隔，有孢子囊，孢子球形，判定为根霉属（Rhizopus）。 菌株特性研究 种子液培养 生长曲线测定 菌株发酵液抑菌效果测定 pH对发酵液抑菌性的影响 pH对菌株生长的影响 接种量对发酵液抑菌性的影响 接种量对菌株生长的影响 从斜面上挑取菌种接种至装有100 mL 种子培养基的250 mL 三角瓶中，于28℃、180 r/min 摇床上培养3 天。 种子培养 将培养好的种子液摇匀按5%接入装有100 mL发酵培养基的250 mL 三角瓶中，于28 ℃、180 r/min 摇床上培养。每隔一段时间取出一瓶发酵液，发酵液6000 r/min离心，烘干，称重。 得到结果如图3.10所示。 生长曲线测定 菌株生长曲线如图3.10所示。由菌体生长曲线知，91h时，菌体生长达到最高峰，之后菌体重量有所降低，符合真菌生长曲线规律，可能因为菌体生长后期产生了溶菌物质。 菌株发酵液抑菌效果测定 取离心后的上清液，用滤纸片做抑菌性实验，得到结果如图3.11所示。 发酵液抑菌性最佳时间出现在84h。据图3.10和图3.11知，发酵液抑菌性物质是产生在菌体生长的指数期的后期，菌体发酵进入衰减期后，抑菌效果有一定的降低。 将培养好的种子液摇匀按5%分别接入起始pH5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，装有100 mL发酵培养基的250 mL三角瓶中，28 ℃、180 r/min 摇床培养。84 h取出发酵液，参照2.2.2做抑菌性实验。84 h时，发酵液6000 r/min离心，取上清液做抑菌性实验。 结果如图3.12所示 pH对发酵液抑菌性的影响 微生物生长过程中机体内发生的绝大多数的反应是酶促反应，而酶促反应有一个较适宜pH值范围，因此产生抑菌物质有最