新孢子虫IFAT方法的建立及吉林省部分地区羊新孢子虫病的血清学调查.pdfVIP

2016年第9期 吉林畜牧兽医 幽 Sh Yan Yan i i Ju 6●鬣 新孢子虫IFAT方法的建立及吉林省部分地 区 羊新孢子虫病的血清学调查 丛艳昭 ，齐 楷 2 孙艳欣 ，于 丹 ，金 燕 ，李 奠 ，董喜平 1．吉林省延吉市动物卫生检疫站 ，吉林延吉 l33000；2．吉林省延边州畜牧总站 ，吉林延 吉 133000；3．吉林省 白城市洮北区洮河镇畜牧站，吉林 白城 137000；4．吉林省前郭县动物疫病预 防控制中心，吉林前郭 l311O0；5．吉林省珲春市牧业管理局，吉林珲春 133300 摘 要：本实验建立 了羊新孢子虫间接荧光抗体试验方法 (IFAT)，并采用该方法检测 了310份来 自吉林省部分地区 的成年羊血清。结果检 出羊新孢子虫抗体阳性血清 30份 ，阳性率为 9．68％。结果表明吉林省某些地区存在羊新孢子 虫的感染。 关键词：羊新孢子虫；间接荧光抗体试验 ；流行病学调查 羊新孢子虫病主要引起孕畜流产、死胎 以及 l3uL，恒温箱干燥 30min，冷丙酮固定 10min， 新生仔畜运动障碍和神经系统疾病。 自然干燥 5～ 10min。包装后 一80℃保存 ，备用 。 迄今为止，我 国对羊新孢子虫病的报道较少， 1．2．2标准阳性血清和 FTIC一兔抗羊 IgG浓度 的 吉林省对羊新孢子虫病 的报道几乎是零 。为此本 确定 人对 吉林省部分地 区的羊进行 了一次血清学调 将羊新孢子虫标准 阳性血清分别作 1：25、 查，目的是了解吉林省是否存在羊新孢子虫感染。 l：50、l：lO0、l：200、l：400倍 比稀释 ，然 后 滴于 12穴 载玻 片 中，每 空 13uL，放湿盒 中， 1 材料和方法 37℃反应 30min，洗涤 。将 FITC一兔抗羊 IgG 1．1主要材料 作 1：300、1：350、1：400、1：450稀释 ，滴于 新孢子虫虫株 ；标准阳性血清和标准阴性血 12穴 载 玻 片 ，每 空 13uL，放湿盒 中，37℃ 清 ；FITC一兔抗羊 IgG (SIGMA公司)；荧光抗 反应 3Omin，洗涤 。滴加磷酸甘油缓冲液，封 体稀释液；NiKonE600型荧光显微镜等 。 片，置荧光显微镜下观察，选择背景荧光少，非 特异性弱，虫体形态清楚，发出亮绿色荧光的为 1．2FAT检测方法的建立 最佳稀释度 。 1．2．1抗原包被 1．2．1．1虫体的纯化 1．3检测流程 虫体在 VerO细胞上培养 72h后刮下 ，用注 首先按最佳稀释倍数稀释标准阳性、标准 射器反复吹打后离心，弃上清 ，用 PBS(pH7．2) 阴性和 待检血 清 。然后 取 出己包被好 的抗 原 溶解 ，再用孔 隙 5um的滤纸过滤 ，2000r／min 玻片，室温干燥 5～ 10min。加入 稀释 好 的血 离心 10min，弃上清，备用 。 清稀释液各 13uL，设一阳性对照孔和一阴性对照 1．2．1．2测定虫体包被剂量 孔，放湿盒中37℃温孵30min，洗涤 10min，干燥 。 将纯化的虫体用PBS(pH7．2)稀释 ，在 400 在避 光条件下加入稀 释好 的荧光 二抗 ，每孔 倍光学显微镜下观察，虫体均匀散在 ，此时就是 1