消毒灭菌,肠道致病菌分离培养和抗酸染色.ppt

（一） 物理因素对细菌的影响 高压蒸汽灭菌法 紫外线对细菌的影响 高压蒸气灭菌法 原理：蒸汽被限制在密闭容器内，随着热力 的作用压力不断升高，蒸汽的温度也 相应升高，在103.4kPa蒸汽压力下 时，温度可达121.3℃。维持15-20分 钟后可杀死细菌包括芽孢在内的所有 微生物。 高压蒸气灭菌器 1) 构造 高压蒸气灭菌器是一个双层的金属圆筒，两层之间盛水，外层坚厚，其上或前方有金属厚盖。盖旁附有螺栓，借以紧闭盖门，使蒸气不能外溢。 高压蒸气灭菌器上装有排气阀、安全阀，以调节器内压力，装有的温度计及压力表以示内部温度和压力。 器内装有带孔的金属搁板，用以放置欲灭菌对象。 2)使用方法 ①加水至锅内达规定的水平面，放入欲灭菌物品，把锅盖按对称的螺旋先后对称用力（切勿单个依次）扭紧，使锅盖确实均匀密闭。 ②用电炉加热，同时打开排气阀门，使器内冷空气逸出，待空气全部排出后，关闭排气阀。 ③继续加热并观察压力表，器内压力又逐渐升高，直到压力表指在所需数字（例如15磅）即调节热源，维持20～30min．可完全杀死细菌的繁殖体和芽胞。 ④灭菌时间到达后，停止加热，待压力自行下降至零时方可徐徐开放排气阀，排尽余气，打开锅盖，取出灭菌物品。 3)注意事项 ①检查排气活塞及安全阀门，特别是压力表的性能是否正常，以免发生危险。 ②灭菌物品不应放置过挤，妨碍蒸气流通，影响灭菌效果。 ③灭菌开始时必须将器内冷空气完全排除，否则压力表上所示压力并非全部是蒸气压力，灭菌将不彻底。 ④灭菌过程中及灭菌完毕，灭菌后切不可排气过急，突然打开排气阀门放气减压，以免瓶内液体外溢或者破裂。 紫外线对细菌的影响 原理：紫外线主要作用于DNA，使一条DNA链上的两个相邻胸腺嘧啶以共价键结合成二聚体，从而干扰DNA的复制与转录导致细菌变异或死亡。对病毒也有破坏作用。 密涂接种 1. 促进菌体蛋白质变性或凝固; 2. 干扰细菌酶系统和代谢; 3. 损伤细菌的细胞膜，影响细菌的化学组成， 物理结构和生理活动。 有些化学药品浓度高时能杀灭病原微生物，称为化学消毒剂；浓度低时能抑制细菌生长，称为防腐剂。（只能外用，对细菌的敏感性不同） 化学消毒剂分类 高效消毒剂：杀灭细菌芽孢在内的所有微生物，适用于 不耐热力灭菌但要进入人体内部的物品，如内窥镜等。 如：次氯酸钠、过氧化氢、甲醛、环氧乙烷等 中效消毒剂：不能杀灭芽孢，但能杀灭繁殖体（包括结 核杆菌），真菌和大多病毒，适用于喉镜，麻醉器材等。 如：碘酊、乙醇等 低效消毒剂：能杀灭大多细菌繁殖体，但不能杀灭芽 孢，结核杆菌及某些抵抗力强的真菌和病毒。 如：新洁尔灭、洗必泰、高锰酸钾等 化学消毒剂对细菌的影响 二、肠道致病菌的分离培养 2、活泼的生化反应 SS培养基的特性（Salmonella -Shigella Medium） 胆盐抑制G+,枸橼酸钠和煌绿能部分抑制大肠杆菌,致病的沙门菌和志贺菌能大量生长。 中性红指示剂和乳糖,中性红遇酸变粉红。 常用于培养肠道致病菌。 SS平板 大肠杆菌 粉红色大菌落 痢疾杆菌 无色细小 半透明菌落 伤寒杆菌 无色细小 半透明菌落 将粪便标本以分区划线法接种到SS培养基。 (每个实验室8个平板，接种好后，做好标记，用胶布按班绑好） 注：每个平板只可操作一次，不可重复操作 放入37℃温箱中培养24小时。取出放4℃冰箱中保存备用。 预习下周实验内容： 肠道致病菌的鉴定； 药敏试验； 内毒素的检测。 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用3%盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。 【实验原理】 细菌：卡介苗 （Bacillus Calmette-Guerin， BCG） 染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美兰溶液 其它：接种