章抗原抗体反应.ppt

二、比例性 (proportionality) 指抗原抗体的量比关系，即只有当抗原抗体的浓度比例适当时，才出现可见反应。 以沉淀反应为例（Ab量固定,Ag量递增） 图 Question： 等价带 前带 后带 抗原抗体反应比例性示意图 Why? 抗原多价，抗体双价 二者比例合适 Ag/Ab过剩 网格 学说 网格学说（图） 抗体的两个Fab段分别 结合两个Ag分子，相互 交叉结合连接成巨大的网格状立体聚合物，（可见）。 二者比例合适： Ab/Ag过剩 过剩方的结合价得不到饱和，大多数游离存在，只形成小分子复合物（不可见）。 网格学说（图） 切记！！！！ 确定 的浓度非常重要，即在实验中需对Ag/Ab进行适当的 ，调整二者的比例，产生可见反应。 一般原则：固定 含量（ Ag/Ab ）的浓度，稀释 含量的 (Ab / Ag)。 一般可溶性Ag稀释 ，颗粒性Ag，稀释 。 Ag/Ab 稀释 低 高 Ag Ab 三、可逆性（reversibility）或表面性 解离 1. Ag + Ab Ag —Ab 一定条件 （动态平衡） 动态平衡公式: [Ag] + [Ab] [Ag-Ab] K1:结合常数；K2：解离常数 K1 K2 * 利用抗原抗体反应的特异性和可见性，即：抗原抗体相互吻合、高度互补，使两者紧密接触，产生足够的结合力，从而以非共价键可逆结合，达最适比例时，出现肉眼可见的反应——如凝集、沉淀、溶血等。 * 利用抗原抗体反应的特异性和可见性，即：抗原抗体相互吻合、高度互补，使两者紧密接触，产生足够的结合力，从而以非共价键可逆结合，达最适比例时，出现肉眼可见的反应——如凝集、沉淀、溶血等。 * 1、分子间引力 （1）静电引力（electrostatic forces） 或库仑引力（Cou-lombic forces） 指带电离子基团（如：—NH3+和 —COO-） 之间的引力，距离越近引力越大。 当抗原与抗体上带有相反电荷的电离基团时，由于正负电荷相互吸引而促使抗原与抗体结合。 * 2.范德华引力（Van der Waals forces） 分子间（或原子间)相互接近，分子极化产生引力，其作用取决于分子空间构型，如：凹槽与凸起互补，抗原与抗体，酶与底物。能量小于静电引力。 偶极摆动： * （3）氢键结合力 （hydrogen bounding force） 指供氢体氢原子与受氢体原子 之间的引力—“氢键桥梁” ，能量 大于范德华引力。 * （4）疏水作用力  （ hydrophobic force ） 指疏水基团间排斥水分子，相互聚 集的力。 作用力最强，占总结合力的50％。 * In brief：总之 * 在免疫化学中，一般用：亲和力（affinity）及亲合力（avidity）表示。 * 　二、抗原抗体反应特点：P72　　　1.特异性　　　2.最适比度　　比度：Ab稀释度或Ag稀释度　　　3.可逆性Ag+Ab??? AgAb　　　4.亲和力　亲和常数K＝K1/K2　　所以K越大越好 * 1.最适比（optimal ration）最迅速出现可见反应的抗原浓 度。全部沉淀，上清液清晰， 几乎无游离的Ag/Ab 2.等价带（equivalencezone）:Ag、Ab比例合适 的范围。 3.前带（prozone）: Ab过剩不出现可见反应 4.后带（postzone）： Ag过剩不出现可见反应 * 是医学检验的重要学科之一 * 三.影响因素：P74　　　1.电解质：缓冲液：反应条件最好，价格便宜，配制方便　　　2.PHeg:why 37℃1h而不用0.5h　why PH7.4　　不是7.6　　　3.温度：45℃　37℃　4℃　　　　温度选择反应完全，即AgAb多反应时间短　　　　条件较易创造　　　　温度高,反应时间短，形成复合物结构松　　　　温度低,反应时间长，形成复合物结构紧　　　4.反应时间 * 温度升高，分子运动快，碰撞接触机会多，结合速度快。 * 临床免疫学检验（ Clinical Immunoassay） 昆明医科大学附属甘美医院检验医学教研室 田 敏 (Min Tian) 学好临床免疫检验，必须掌握“一个核心，三个要素与四个标记”。 一个核心： 抗原抗体反应(Antigen-antibody interaction)