DNA复制.ppt

DNA聚合酶Ⅰ切除引物填补空缺DNA连接酶封闭缺口 先导链和后随链几乎同时复制 DNA全酶以二聚体的形式存在，同时 进行先导链和后随链的合成 新链合成方向：5’→3’ 3. 复 制 延 伸 的 特 点 前导链和后随链的同步合成 β亚基 核心亚基 SSB 解旋酶 前导链 引物酶 引物 后滞链 DNApolⅠ 连接酶 新链 冈崎片段 阶段一 阶段二 阶段三 阶段四 （三）复制的终止 Tus蛋白结合终止位点阻止复制叉前进 大肠埃希菌基因组的终点区 本 章 小 节 掌握： DNA复制的基本概念及其相关酶系； 原核生物DNA复制的基本过程。 熟悉： 真核生物DNA复制的酶及其作用。 * * Avirulent mutants：无效突变。 Transfection：转染。一般有两个意思。1.感受态细菌细胞被裸露的噬菌体DNA转染而转化，产生感染性噬菌体颗粒。只是DNA而无蛋白质衣壳参与，且细菌细胞必须对DNA（使用原生质体或原生质球状体）有通透性。2.在组织培养中，外来DNA导入真核细胞，DNA可以是病毒DNA或其他类型的DNA。 Transforming principle：转化因子。在转化作用中参入到接受体细菌细胞的那段提纯的DNA。首先在肺炎球菌（pneumococcus）的转化作用中被发现。亦称transforming factor。 * 1．半保留复制 1953年，WatsOn和Crick建立DNA的双螺旋模型，即DNA分子的两条链以反向平行的方式组成双螺旋结构，双螺旋内碱基A—T、G—C相互配对。根据此模型又提出了DNA的半保留复制机制：认为DNA的复制是将两条亲本链分开，每一条作为合成新链的模板，按碱基配对的规则合成新链，形成两个子代DNA双螺旋结构。子代DNA的双链中一条是原来的链，另一条是新合成的链，所以称之为半保留复制(见图4-1)。 * 这一假说已由Meselson和Stahl在1957年设计的实验证实(见图4—2)。他们将大肠杆菌 置于以15NH4Cl为惟一氮来源的培养基中，在细菌繁殖数代后，使其DNA分子中的碱基氮基本上都为15N (亲代)，然后将培养基中的15NH4Cl换成14NH4Cl。从14NH4Cl培养基中生成的第一代细菌中提出DNA(子一代)，经密度梯度离心，获得一条DNA带(杂合带)，其中一条链上氮为15N，另一条链上氮为14N，从14NH4Cl培养基中生成的第二代细菌中提出DNA (子二代)，经密度梯度离心，获得两条DNA带，一条为轻带(氮都为14N)，另一条带为杂合带，比例相同。从14NH4Cl培养基中生成的第三代细菌中提出DNA(子三代)，经密度梯度离心，获得两条DNA带，一条为轻带(氮都为14N)，另一条带为杂合带，比例3：1，这个结果说明，DNA在复制时，亲代DNA的每一股链都作为模板，生成两个完全相同的子代DNA，所以DNA的复制是保留的，故称为半保留复制。 * ——DnaB在DNA复制中，通过水解ATP释放出的能量解开复制叉的DNA双链。 ——single strand DNA binding protein, SSB：选择性地结合并覆盖在单链DNA上，防止DNA复制过程中，解开的单链被酶水解及重新结合成双链。包括呼吸作用形成的单链，和解旋酶形成的单链。 ——多数天然DNA是负超螺旋，但5%的环形DNA已经复制后，负超螺旋已经耗尽，产生正超螺旋，影响复制叉推进。DNA旋转酶作用一次产生两个负超螺旋。 * ——DnaB在DNA复制中，通过水解ATP释放出的能量解开复制叉的DNA双链。 ——single strand DNA binding protein, SSB：选择性地结合并覆盖在单链DNA上，防止DNA复制过程中，解开的单链被酶水解及重新结合成双链。包括呼吸作用形成的单链，和解旋酶形成的单链。 ——多数天然DNA是负超螺旋，但5%的环形DNA已经复制后，负超螺旋已经耗尽，产生正超螺旋，影响复制叉推进。DNA旋转酶作用一次产生两个负超螺旋。 * ——DnaB在DNA复制中，通过水解ATP释放出的能量解开复制叉的DNA双链。 ——single strand DNA binding protein, SSB：选择性地结合并覆盖在单链DNA上，防止DNA复制过程中，解开的单链被酶水解及重新结合成双链。包括呼吸作用形成的单链，和解旋酶形成的单链。 ——多数天然DNA是负超螺旋，但5%的环形DNA已经复制后，负超螺旋已经耗尽，产生正超螺旋，影响复制叉推进。DNA旋转酶作用一次产生两个负超螺旋。 （3） 单链DNA结合蛋白