蛋白质纯化、结晶及晶体结构解析技术简介 - 中心实验室.pdf

药学院中心实验室仪器技术讲座系列之十六 蛋白质纯化、结晶及晶体结构解析技术简介 报告人：陈芸芸 日 期：2014年11 21日 目录 1. 蛋白质纯化技术简介 2. 蛋白质结晶技术简介 3. 晶体结构解析 一、蛋白质纯化技术简介 质粒构建 质粒转化（BL21 ） 蛋白表达（IPTG ） 蛋白纯化（层析、超滤） 高纯度蛋白（95%以上） 二、蛋白质结晶技术简介 坐滴法 悬滴法 溶液达到过饱和状态——晶体析出 坐滴结晶板 悬滴结晶板 蛋白晶体培养箱 温度：4℃ ，16℃ mosquito® crystal蛋白结晶筛选液体工作站 主要特性 ■ 低体积液体处理：25nL – 1.2μL 准确、可重复的液体处理系统 可精 确处理各种粘度和表面张力的液体， 使用一次性针头，无需费时的洗涤过 程，确保无交叉污染 ■ 灵活性与精确性：移液程序设置 时间仅2分钟/板 ，针头定位准确， 池液可精确覆盖蛋白样品 ■ 可靠性 ：mosquito crystal使用 简便，仅需半天培训即可熟练操作 容积置换型针头，处理不同的液体时 无需校准 具有无可比拟的可靠性 晶体初步观察 Leica 偏光显微镜 蛋白质晶体 三、晶体结构解析 从晶体到结构 数据处理 质量好的衍射图 质量差的衍射图，需要删除 一套衍射数据一般有一千多幅衍射图，通常有几千幅，多则上万幅 结构解析 电子密度图 结构确定 结构精修 ① ② 不理想状况：原子多，结构复 杂，无序…… ③ 问题：晶胞不对？空间群不对？数据不好？晶体质量不好？…… ④