动物细胞融合单克隆抗体制备过程.ppt

植物体细胞杂交过程： * 植物细胞A 植物细胞B 去除细胞壁 去除细胞壁 原生质体A 原生质体B 诱导融合 杂合的原生质体 再生出细胞壁 杂种细胞 细胞分裂（脱分化） 分化发育（再分化） 愈伤组织 杂种植株 原生质体的制备 原生质体的融合 筛选 组织培养 1、如果让动物细胞进行融合/杂交，应注意动、植物之间的哪些区别？ 无细胞壁 全能性受限制，不能发育成杂种动物 2、请设计动物细胞融合的流程。 动物细胞融合与植物细胞杂交的不同： 无需去除细胞壁 不能培养成新的动物个体 动物细胞融合过程 不同DNA的两个细胞 灭活的病毒 有丝分裂 两个完整的杂交细胞 1、为什么可以用灭活的病毒？ 2、病毒不灭活可以吗？ 不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 5、过程： 动物细胞A 动物细胞B 诱导，融合 完整的杂交细胞AB （膜融合、质融合） （核融合） 注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞 一、动物细胞融合（细胞杂交） （P52） 1.概念： 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 2.结果： 形成含有2或多个细胞遗传物质的单核杂交细胞 3.融合原理： 细胞膜的流动性 4.诱导方式 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒 5.意义： 突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能 广泛应用多个领域（研究细胞遗传、细胞 免疫、肿瘤和生物新品种培育等） 重要用途：制备单克隆抗体 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 1.抗体是由何种细胞产生的？ B淋巴细胞——浆细胞（效应B细胞） 2.一个B淋巴细胞能产生多种抗体吗？ 每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 3.动物免疫反应产生的抗体只有一种吗？ 针对不同抗原，B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 二、单克隆抗体的制备 单克隆抗体：化学性质单一、特异性强的抗体 传统血清抗体的制备方法：向动物体内反复注射某种抗原，使之产生抗体，然后从动物血清中分离所需要的抗体。 缺陷：产量低、纯度低、特异性差 4.简述获得抗体的传统途径？ 这种方法获得的抗体有什么缺陷？ 科学家的设想：克隆（无性繁殖）单一的B淋巴细胞，形成细胞群，产生大量高纯度抗体。 存在的困难： 体外培养的B淋巴细胞不可无限增殖 问题1：哪种细胞可以无限增殖呢？ 肿瘤细胞 问题2：怎样让细胞既能大量繁殖，又能产生专一抗体呢？ B淋巴细胞与肿瘤细胞进行细胞融合,制备单克隆抗体 怎样获得大量高纯度抗体呢？ 二、单克隆抗体的制备 问题1：怎样让动物产生特异性针对某种抗原的B淋巴细胞（浆细胞）？ 对动物注射这种抗原，产生免疫反应 问题2：诱导融合后，培养液中会有几种细胞？如何处理？ 5种（B—B;B—瘤;瘤—瘤;B细胞;瘤细胞），筛选 问题3：从动物体内提取B淋巴细胞时，能否确保B淋巴细胞的单一性？杂交的细胞是否都是符合要求的？ 不能，可能存在多种B淋巴细胞，融合为多种杂交瘤细胞，所以需多次检验、筛选后，才能大规模培养，获得专一抗体。 请设计单克隆抗体制备过程的简要方案： B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 筛选（选择性培养基） 杂交瘤细胞 细胞培养 克隆培养、抗体检测、多次筛选 足够数量、能分泌单一抗体的细胞群 单克隆抗体制备过程 注射抗原 体内培养 体外培养 单克隆抗体 杂交瘤细胞特点： 既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体。 诱导融合 筛选培养 杂交瘤细胞（B-瘤细胞） 克隆化培养 抗体检测 多次筛选 足量单一类型 杂交瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔 体内培养 单克隆抗体 单克隆抗体制备流程图 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 小鼠免疫 B-B细胞 B-瘤细胞 瘤-瘤细胞 未融合细胞 单克隆抗体的优点： 纯度高,特异性强,灵敏度高,产量大 选择性培养基 诱导其融合的方法有哪些？ 融合后培养液中有几种细胞 怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点 注射抗原的目的是什么 大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法 三、单克隆抗体的应用 （1）作为诊断试剂——最广泛的用途